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1、甘草多糖对小鼠免疫调节作用的影响李发胜,赵珏,池晓峰,杨波,燕小梅,刘海日【摘要】目的观察甘草多糖对小鼠免疫调节作用的影响。方法采用水提醇沉法提取甘草多糖,用卵清蛋白为抗原给小鼠注射后,将48只小鼠随机分为4组,分别为甘草多糖低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量实验组及对照组,每组12只。对照组给予生理盐水灌胃,实验组予以不同剂量甘草多糖灌胃,灌服小鼠7d,加强免疫后,检测相应抗体生成水平和血清中γ-干扰素(IFN-γ)生成水平。结果与对照组比较,甘草多糖中、低剂量组卵清抗体生成水平、IFN-γ激
2、发水平均显著增高(P＜0.05,P＜0.01)。结论甘草多糖对小鼠机体免疫有增强作用。【关键词】甘草；多糖；免疫调节；γ-干扰素；小鼠Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofGlycyrrhizapolysaccharide(GP)onimmunefunctioninmice.MethodsPolysacchayideGlycyrrhizauralensisbyethod.Ovalbuminiceasantigens.Themicelydividedintofourgroup：log/kg),mid
3、dle(100mg/kg),high(200mg/kg)dosagegroupofGPandnormalcontrolgroup,12miceineachgroup.Fourgroupsmunization,thelevelofantibodyandtheconcentrationofserumIFN-γined.ResultsThelevelsofantibodiesandcytokinesinmiddleandlomunefunctionofmice. Keymunomodulation；IFN-γ；mice甘草为豆科植物甘草
4、(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根及根茎。味甘,性平。入心、肺、脾、胃经。具有和中缓急、润肺、解毒、调和诸药之功效。主治脾胃虚弱、劳倦发热、消化性溃疡等。几十年来人们发现,从植物中提取的多糖不仅参与了细胞的各种生命现象的调节,而且还与细胞表面的多糖体的介导有密切关系[1]。越来越多的药理研究表明,多糖类化合物是一种免疫调节剂,它能激活免疫细胞,提高机体的免疫功能,且对正常细胞毒副作用较小[2]。笔者从甘草根中提取出甘草多糖(GlycyrrhizaPolysaccharide,GP),对灌服甘草多糖的小鼠
5、免疫应答水平进行了检测,探讨甘草多糖的免疫调节作用。 1实验材料 1.1动物昆明种雄性小鼠48只,体重(20±2)g,大连医科大学实验动物中心提供,合格证号：SCXK(辽)2008-0002。 1.2药物甘草药材购自大连国药大药房,经大连药品检验所郭月秋主任药师鉴定,为人工种植3～5年生甘草根侧枝干燥切片。甘草多糖提取方法：称取已干燥的甘草250g,加入适量80%乙醇过夜,回流提取3h脱脂,药渣挥尽乙醇后,沸水提取2次,每次2h。合并提取液,浓缩至200mL,加95%乙醇使醇含量达到80%,于4℃冰箱中醇沉过夜。抽滤,滤渣依次
6、用无水乙醇、丙酮洗涤,得到粗多糖。将粗多糖溶于水,用Sevage法除蛋白,反复进行3次至无蛋白。流水透析后,蒸发浓缩至200mL,加95%乙醇使醇含量达到80%,于4℃冰箱中醇沉过夜。抽滤,滤渣依次用无水乙醇、丙酮洗涤,真空干燥。即得甘草多糖,得率为4.02%。 1.3仪器与试剂酶标仪(美国OrganonTeknika公司)。生理盐水(四川科伦大药厂生产),批号A000586.08。小鼠IFN-γELISA试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)。 1.4抗原制备取市售鸡蛋,将壳击碎后取卵清1∶5倍稀释备用。 2实验方法 2.1分
7、组及给药取小鼠48只,随机分为4组,每组12只,分别为甘草多糖低、中、高剂量组及对照组。进行第1次免疫,注射卵清蛋白抗原,剂量为每只小鼠0.2mL,注射部位为腹股沟。注射抗原后的第3日开始给药,实验组小鼠灌胃给予甘草多糖,给药量分别为50、100、200mg/(kg?d),对照组小鼠灌胃给予生理盐水,剂量均为每只0.5mL,连续7d。第8日进行第2次加强免疫(方法同第1次免疫),继续灌胃给药,1周后,小鼠断头采血,离心分离血清,分装后备检。 2.2抗体效价测定 2.2.1卵清蛋白抗体测定 采用酶联免疫吸附试验(ELISA),具
8、体操作按文献[3]进行。以卵清蛋白包被酶标板测定相应抗体,以吸光值A表示抗体水平。 2.2.2γ-干扰素测定 采用小鼠IFN-γELISA试剂盒测定,所有操作均严格按试剂盒使用说明书进行。待测血清作1∶10稀释。IFN-γ检测
