灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能调节作用的实验研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com微生物学杂志2003年3月第23卷第2期JOURNALOFMICROBIOLOGYMar．2003Vo1．23No．251·研究报告·灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能调节作用的实验研究江振友，林晨(暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室，广东广州510632)摘要研究灵芝多糖(G)对小鼠细胞免疫功能调节作用的影响。实验小鼠分成4组，分别经胃灌注不同剂量(高、中、低)灵芝多糖，每天1次，连续14d，对照组小鼠用以等量蒸馏水代替。分别于实验第15，28d进行小鼠细胞免疫功能调节作用的测试。灵芝多

2、糖喂药后2周，3个剂量组小鼠脾淋巴细胞转化试验、小鼠腹腔巨噬细胞对鸡血红细胞的吞噬百分率和吞噬指数；低剂量组小鼠迟发型变态反应(DTH)、小鼠碳廓清；高荆量组小鼠NK细胞活性和对照组比较均有显著性差异(P<0．05)。喂药后4周：上述实验结果和对照组比较均无显著性差异(P>0．05)。结果提示灵芝多糖能提高小鼠的非特异性和特异性细胞免疫功能。关键词灵芝多糖；细胞免疫；迟发型超敏反应；淋巴细胞转化试验中圈分类号R979．5文献标识码A文章编号1005—7021(2003)02—0051—04灵芝多糖(GanodermaLucidum

3、polysaccha．(NAD)1．3×10一mol／L。将上述试剂溶于0．2rides)系灵芝[GanodermaLucidum(Leyss．exFr．)mol／L的Tris．HCl缓冲液中(pH8．2)。Karst]的主要有效成分，现代药理研究表明，灵芝1．1．3实验动物和细胞NIH小鼠，6～8周龄，具有多方面的生物活性和药理作用。灵芝多糖具每只(20±2)g，广东省医学实验动物中心提供。有免疫增强和抗肿瘤作用【1,2J。近年来，灵芝的Yac．1，中山医科大学动物中心提供。药理研究己进入细胞、分子乃至基因水平。本文1．2方法旨

4、在整体条件下，研究观察灵芝多糖对小鼠脾淋1．2．1实验分组小鼠随机分为4组，每组30巴细胞转化试验、NK细胞活性、DTH、碳廓清试只。即对照组(CK)、灵芝多糖高浓度组(HD)、中验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响，以探浓度组(MD)和低浓度组(LD)；用蒸馏水溶解稀讨灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能的调节作用，为释灵芝多糖(G)，每组均按0．5mL／只灌胃。灵芝的免疫增强和抗肿瘤作用、滋补强壮、扶正固高、中、低浓度组小鼠灌胃灵芝多糖剂量分别为本作用提供理论依据。2．15mg／只、0．65mg／5~、0．22mg／只；CK组同时以蒸

5、馏水0．5mL／只灌胃。每日1次，连续21材料与方法周，于15d每组取20只小鼠进行细胞免疫功能1．1材料调节作用测试，其余10只动物于第15d起停止1．1．1主要药品试剂灵芝多糖G，按文献给予受试物，正常喂养至第28d进行细胞免疫功[3，4]方法提取，化学组成是以葡萄糖、半乳糖为能测试。主的杂多糖，糖苷键连接方式以B(1—4)为主，稍1．2．2小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)无菌多口(1—6)，相对分子质量9000；RPMI1640细胞取脾，将脾撕碎，经200目筛网过滤，用Hanks液培养液为Hyclone产品，小牛血清为Gib

6、co公司产洗3次，调整细胞浓度为2×10个／mL。加入24品。2．巯基乙醇、刀豆蛋白A(ConA)、MTT、二硝孔培养板中，每孔1mL，一孔加浓度为100g／基氟苯(DNFB)为sigma公司产品；INT、PMS为mL50LConA液(相当于5／~g／mL)，另一孔不fluka公司产品；NAD为se1"va公司产品；印度墨加ConA作为对照，置5％co2，37℃培养72h。水(英国产)。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0．7mL，加1．1．2LDH基质液乳酸锂5×10吒mol／I．；硝入0．7mL不含小牛血清的RPMU640培养

7、液，同基氯化四氮唑(INT)6．6×10mol／I．；吩嗪二甲时加入M1vr(5g／L)50L／孑L，继续培养4h后，酯硫酸盐(PMS)2．8×10叫mol／L；氧化型辅酶I每孔加入1n酸性异丙醇，完全溶解紫色结晶收稿日期：2003—01—24作者简介：江振友男，剐教授。现从事病毒致病与免疫的分子生物学研究。维普资讯http://www.cqvip.com微生物学杂志23卷后分装到96孔板中，每孔分装4孔作为平行样，入生理盐水2mL。然后吸出腹腔洗液1mL，平用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度均滴于2片载玻片上，37℃3

8、0min。生理盐水漂值。采用单因素方差分析比较各试验组与对照组洗除去未贴片细胞。1：1丙酮甲醇溶液固定，体的差异。用加ConA孔的光密度值减去不加积比4％Giemsa．磷酸缓冲液染色3min，漂洗晾ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力。干。采