灵芝多糖的提取及对小鼠免疫功能影响的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第2l卷湖北师范学院学报(自然科学版)Vo【2l第3期JournalofHubeiNormalUniversity(Natura【8cience)NO．3．200l灵芝多糖的提取及对小鼠免疫功能影响的研究董昌金(湖北师范学院生物系．湖北黄石435002)摘要：研究灵芝多糖的提取方法和多糖对小鼠免疫功能的影响．蛄果表明：每天灌胃o．5或10g／kg体重更芝多棒(GLP)，连续25天．可日月显促进小鼠特异性抗体的形直，促进小鼠巨噬知胞的吞噬功能，增加外同血T淋巴细胞数量．建

2、缓胸腺萎缩，并可对抗由CY所致的细胞免疫和惟液免疫低下的作用美毽词：曼芝；多糖；提取；免疫功能中圈分类号；Q53文献标识码：A文章编号：l009—2714(2001)03—0072—03灵芝(Ganodermalucidum)是一种名贵的药用真菌，药理实验证明灵芝多糖D能增强巨噬细胞的吞噬能力，促进血清、肝和骨髓蛋白质合成．促使制造B细胞的骨髓RNA和DNA的合成．多糖BNC能增强T细胞增生，a一和葡聚糖、GI～l杂聚糖和酸性杂聚糖、三种多糖蛋白抑制Sarcoma180生长，GanoderanA、B和c降低原生质葡萄

3、糖水平．水解性多糖有强心作用。三萜化合物中，GanodericacidB、C、Mf和X．GandoermicacidO、Q、R、S和T—o抑制胆固醇合成，GanodericacidC和D抑制组胺释放，GanodericacidR和s有强烈的抗病毒作用。蛋白质IZ一8促进淋巴细胞分裂，具有免疫活性。灵芝的总生物碱扩张心脏冠状动脉，增加冠状动脉血流，减少冠状动脉阻力和心肌氧消耗．其中r一三甲胺基丁酸抗缺氧和增加冠状动脉血流量。1材料①赤芝(来自广东微生物所)②小鼠选用LACA种，20+0．5g雌雄各半；胚鼠，取新鲜血清，

4、1：10稀释，作补体用(小鼠、胚鼠均来自广东药学院病理研究室)③鸡红细胞(Chickenredbloodcell，CRBC)成年公鸡，心脏取血按1：5比例于灭菌的Alsevers液中，置冰箱保存．同时配成7的鸡红细胞悬液．每鼠腹腔注射0．2ml免疫。④药物与试剂环磷酰胺(cyclophsphamide，CY)、糖原(Glycogen)、醋酸一1一萘酯(1一Naphthy【acetate2方法2．1夏芝菌丝体的培养采用液体深层发酵培养。玉米粉1、葡萄糖2、酵母粉0．5、KHPO0．1、MgSO0、075、pH4．5-5

5、．0。温度30c通气量以1：1～1：0．5为宜．接种量为5～lO，放罐标准为：①菌丝体含量1j一2o(湿重)；②发酵液pH值为2．5—3．0：@气味清香，残糖0．1左右；④菌丝体形态，菌丝衰收蔫日期200]一D3l8作者筒介-董昌垒(1963)．男．硕士、讲师·72·维普资讯http://www.cqvip.com老，少数自溶，无锁肽联合；⑤培养时间4—7天。。2．2灵芝多糖(GLP)的提取。本研究按lg(3)‘正交设计，用灵芝菌丝体和子实体作材料，采用热水授提法，按表1中实验号、加水量、提取时间、提取次数、提取菌丝

6、体和子实体，提取液合并后蒸发浓缩，再加相应浓度的乙醇，静止过夜，过滤得多糖粗品，再重复用相应浓度乙醇提取，可得浓度较高的多糖精品。表l实验设计2．3取体重2O±0．5g小鼠180只，雌雄各半，实验组每天灌胃GIP0．5mL／只，对照组每天灌胃蒸馏水0．5mI／只，连续25天，并按下面分四个大组进行实验设计。2．3．1取5O只小鼠分五个小组，培养第l5天时，用CRBC进行免疫。CY及GIP+CY组同时腹腔注射(160mg／kg)，10天后用溶血素测定法“测每小组IgM抗体生成情况，以光密度(O．D)表示。2．3．2取3

7、0只小鼠分三个小组，培养第16天后试验组每天腹腔注射糖原2．5ml(浓度0．3)。4天后取腹腔巨噬细胞加定量的CRBC。一起孵化、制片、镜检，每片计数100个巨噬细胞，测定其吞噬百分率及吞噬指数。2．3．3取50只小鼠分成5个小组．采用酸性萘酯酶(ANAE)反应法测定小鼠外周血T淋巴细胞的数量，以ANAE阳性细胞百分率表示。2．3．4取50只小鼠分5个小组，GIP灌胃25天后处死，摘取胸腺及脾脏、称重，观察GIP对其重量的影响。3结果3．1灵芝多糖(GIP)的提取本研究按I檀(3)正交设计，用灵芝菌丝体和子实体作材料

8、，采用热水浸提法，研究表明，灵芝多糖较理想提取工艺为：加水30—40倍，热水浸提3次，每次授提1小时，醇析乙醇浓度为85，采用蒽酮比色法测定多糖含量“：，快速、简便、准确，便于工厂推广和应用。3．2GI，P对正常及CY小鼠体液免疫的影响表2GLP对正常爰CY小鼠体液免疫的影响与对照组比，*P<0OOl；与CY组比．**P<0．001由表2可知，