赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响

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1、赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响作者：郭雯王英军姜秀莲李航【摘要】目的旨在赤灵芝提取物对细胞、体液及非特异性免疫功能的影响。方法以520、260mg/kg赤灵芝提取物给昆明种雄性小鼠灌胃15d，分别进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、足跖增厚法测定小鼠迟发型变态反应、半数溶血值(HC50)测定、抗体形成细胞(AFC)检测、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和网状内皮系统吞噬碳廓清功能测定。结果赤灵芝提取物可明显增强小鼠脾淋巴细胞的转化能力(P<0.001，P<0.01,P<0.05)及体液免疫能力(P<0.01,P<0.05);明显抑制由SRBC引

2、起的小鼠DTH反应(P<0.01,P<0.05);增强腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.001);对碳廓清无明显影响。结论赤灵芝提取物具有免疫调节作用，可明显增强小鼠脾淋巴细胞的转化能力及体液免疫能力。【关键词】赤灵芝水提取物;赤灵芝醇提取物;体液免疫;细胞免疫灵芝多糖是灵芝中的主要免疫药另学活性成分，其作用主要表现在：①对正常小鼠的免疫功能具有增强作用;②增强人脐血LAK细胞活性，且呈剂量依赖关系;③对免疫抑制药物(如氢化可的松、环孢霉素A、环磷酰胺等)和抗肿瘤药物(如氟尿嘧啶、丝裂霉素C和阿糖胞苷等)及应激、衰老等因素所致小鼠免疫功能低下具有明显的恢复作用〔1～3〕。

3、本试验拟赤灵芝提取物对小鼠免疫系统的影响，为开发和利用赤灵芝的药用和保健价值提供科学依据。　　1材料与方法　　1.1实验动物及分组昆明种雄性健康小白鼠50只，体重18～22g，由长春生物制品所提供合格证号为101001。随机分为5组，正常对照组(生理盐水)和赤灵芝水提取物低(260mg/kg)和高剂量(520mg/kg)组及赤灵芝醇提取物低(260mg/kg)和高剂量(520mg/kg)组各10只，连续灌胃15d。　　1.2试剂赤灵芝水提取物和醇提取物均为25g生药/g粉。RPMI1640完全培养液(GIBCO产品)，小牛血清，刀豆蛋白(ConA)液均为Sigma产品，绵羊红细胞(S

4、RBC)，豚鼠血清。　　1.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)〔4〕末次给药后1h在超净台内，无菌取小鼠脾于无菌Hanks液培养皿内，用毛玻璃片磨碎，过滤细胞悬液，洗涤一遍，1000r/min，离心5min，用2mlRPMI1640培养液悬浮细胞，取10μl细胞悬液，调细胞浓度至2×106/ml，加入24孔培养板，每孔1ml/孔。实验孔加入ConA20μl，终浓度5μg/ml。37℃，5%CO2孵箱内培养68h，倒置显微镜下观察细胞形态。每孔吸去培养上清液0.7ml，再加不含血清的RPMI1640培养液，加入MTT溶液50μl/孔(5mg/m1)，继续孵育4h，加入酸性

5、异丙醇溶液1ml/孔，吹打混合均匀，待颗粒结晶完全溶解。将溶解液分加到96孔板中，200μl/孔，每个样本作3复孔，酶标仪上读出OD570nm值。　　1.4足跖增厚法测定小鼠迟发型变态反应(DTH)〔4〕于给药后11d对小鼠进行致敏，每只小鼠腹腔注射2%绵羊SRBC0.2ml/只进行免疫，免疫4d后，测量左后足跖部厚度，然后，在测量部位皮下注射20%(V/V)SPRC20μl/只，注射后于24、48h分别测量左右足跖部厚度，同一部位测量3次取平均值。　　1.5半数溶血值(HC50)测定于给药11d对小鼠进行腹腔注2%(V/V)SRBC0.2ml/只进行免疫，免疫4d后处死小鼠取血离心(

6、2000r/min，10min)，收集血清并用SA液稀释500倍，取1ml稀释血清加入10%(V/V)SRBC05ml，补体10ml进行血清溶血素测定，记录羊红血球的半数溶血值(HC50)。　　1.6抗体形成细胞(AFC)检测免疫方法同1.5，细胞悬液取得方法同1.3，调细胞浓度至5×106细胞/ml。空斑测定：将1%琼脂糖融化后，45℃水浴保温，与等量的2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，1ml/管。再向管内加100μl10%的SRBC和40μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾注于底层凝胶表面，制成顶层凝胶。待琼脂凝固后，置37℃放置1～1.5h;再加10倍稀释的补体溶液1ml，37℃放

7、置1～1.5h后，计数空斑形成数，用空斑数/106脾细胞来表示，受试组显著高于对照组的空斑数，即可判断该项实验结果阳性。　　1.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定末次给药后30min，每鼠ip20%鸡红细胞溶液1ml/只，注射后30min脱颈椎处死小鼠，经腹腔注入生理盐水2ml，轻轻揉动每鼠腹部1min，然后用吸管吸取腹腔液体lml，均匀涂于2片载玻片上，放入垫有温纱布的搪瓷盆内，37℃水温，30min后，生理盐水漂洗，1∶1丙酮甲醛液固定