余甘子提取物对小鼠免疫功能的影响

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1、余甘子提取物对小鼠免疫功能的影响作者：崔炳权，何震宇，杨泽民，林元藻【摘要】目的探讨余甘子对小鼠免疫功能的影响。方法用不同剂量余甘子提取物给正常小鼠连续灌胃,检测血清溶血素含量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、迟发型变态反应、T淋巴细胞增殖和NK细胞活性。结果余甘子提取物能增加小鼠血清溶血素含量、明显增强小鼠巨噬细胞吞噬功能、改善迟发型变态反应，促进T淋巴细胞增殖，提高NK细胞活性。结论余甘子能显著增强小鼠免疫功能。【关键词】余甘子;免疫功能;溶血素;T淋巴细胞;巨噬细胞;NK细胞;迟发型变态反应　余甘子PhyllanthusemblicaL.又名山油柑

2、、油甘子、余甘果等，为大戟科叶下珠属植物余甘子的成熟果实，广泛分布在广东、福建、台湾、贵州、湖南、广西、四川、浙江和云南等省区。余甘子果入药，中医学认为，余甘子性味甘、酸、涩、凉,归肺、胃经。其功能与主治为清热凉血，消炎,消食健胃,生津止咳;用于血热血瘀、消化不良、腹胀、咳嗽、喉痛及口干[1]。明《本草纲目》曾记载：“余甘子果，主补益气，久服轻身，延年益寿”8。余甘子的药理作用的研究报道很少，为了探讨余甘子的抗肿瘤作用，本实验研究了余甘子提取物对小鼠免疫功能影响，旨在了解余甘子的免疫药理作用机制，为研究其抗肿瘤机制提供研究资料，为余甘子的食用和

3、药用价值的开发提供实验依据。　　1材料　　1.1材料、药品与试剂余甘子采购自四川盐源县。经广东药学院中药学院药用植物与中药鉴定学教研室李书渊教授鉴定为戟科叶下珠属植物余甘子PhyllanthusemblicaL.的成熟果实。余甘子提取物制备：将余甘子晾干，取适量余甘子，常规水煎2次，过滤后混合并浓缩成1g生药/ml，4℃保存备用。2，4二硝基氟苯(DNFB)，二甲基亚砜(DMSO)，上海试剂一厂产品。RPMI-1640，MTT，PHA，Sigma产品。721型分光光度计，CO2培养箱，酶标仪，离心机。　　1.2动物昆明种清洁级小鼠，雌雄兼用，体

4、质量为(20±2)g，由广州市白云区穗北实验动物养殖场提供。　　2方法　　2.1余甘子提取物对小鼠体液免疫功能的影响采用溶血素测定法[2]：小鼠40只,体质量(20±2)g，随机分为4组，每组10只。空白对照组，每天灌胃蒸馏水0.5ml/只;试药大剂量组、中剂量组、小剂量组，每只每天分别灌胃余甘子提取物45,30,15mg/kg，连续128d。给药第2天，每只小鼠腹腔注射5%绵羊红细胞悬液0.2ml免疫，末次给药后禁食24h，断头取血并分离血清，将血清用生理盐水按1∶50稀释，取血清1ml，加5%绵羊红细胞悬液0.5ml和补体1ml，37℃水浴

5、10min，冰浴，离心,取上清液1ml，测定A540，计算样品的半数溶血值(HC50)。用HC50代表血清溶血素水平。　　2.2余甘子提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[3]　　小鼠40只，分组及给药天数和剂量同实验“2.1”项。第12天小鼠称重，后腹腔注射5%淀粉肉汤1ml，致敏24h后，腹腔注射1ml5%鸡红细胞悬液，4h后脱臼处死，腹腔注入5ml冷Hanks液，按摩腹部5min后，解剖，无菌吸取腹腔液涂片，晾干，甲醇固定5min，瑞-姬氏复合染色剂染色，镜检，在油镜下观察，随机计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞及吞噬的鸡红细胞总数，并

6、计算巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数。　　2.3余甘子提取物对小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响T淋巴细胞增殖反应测定(MTT法)[4]：小鼠40只，分组及给药天数和剂量同实验“2.1”项。12d后脱颈处死，无菌取脾，制细胞悬液(5×106/ml)，加入96孔培养板，每孔100μl，再加入含PHA(10μg/ml)的RPMI-1640培养液100μl，每个样品设3个复孔，37℃CO2培养箱中孵育27h，后每孔加入MTT(5mg/μl)10μl，振荡18min，放入37℃CO2培养箱反应3h，取出离心，弃上清，每孔加DMSO200μl，混匀，振荡5min，

7、酶标仪测A500。结果以3个复孔的±s表示。　　2.4余甘子提取物对特异性细胞免疫功能的影响DNFB诱导小鼠迟发型变态反应的测定[2，5]：小鼠40只，分组及给药天数和剂量同实验“2.1”项。给药后第6天进行致敏，在小鼠后肢皮下注射0.02ml1%DNFB，给药第10天同法第2次致敏，于第1次致敏的第9天，用1%DNFB0.02ml涂于右耳进行攻击，左耳涂布生理盐水作为对照。次日处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm的打孔器分别在左、右耳同一部位打下耳片，称重。以耳肿胀度(EPR左右耳片重量之差)作为迟发型变态反应的指标。　　2.5余甘子提取物

8、对非特异性细胞免疫功能的影响NK细胞活性测定[2]：小鼠40只，分组及给药天数和剂量同实验“2.1”项。12d后，处死取脾，制成细胞悬液，按乳酸脱氢酶