黑大蒜提取物对小鼠细胞免疫功能的影响

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1、一、摘要中文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”英文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯三、论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·10实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19四、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21五、参考文献⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22六、附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23在校期间科研成绩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·37致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·39其它的一些生理功能紊乱，人们在实验中还发现其具有降血脂、降血压、降血糖、抗肿瘤、抗菌、抗氧化和免疫调节等功效。大蒜来源的有机硫化合物对一些人类肿瘤，如前列

3、腺癌，胸腺癌，结肠癌，肺癌，膀胱癌等有很好的抑制作用。大蒜的化学组成十分复杂，其中有生物活性的成分超过100种。其中最重要和最独特的是有机硫化合物的含量非常高，是其他含有高硫的蔬菜如洋葱、椰菜的4倍多。近年来日本学者发现在控制湿度和温度的情况下，普通的白大蒜可以经过处理转化为黑大蒜。黑大蒜去除了大蒜的异味，带有甜味，口感好，无需再经处理即可直接食用。已有研究报道黑大蒜较白大蒜含有更多的氨基酸、有机硫和S．烯丙基．L．半胱氨酸，因此与白大蒜相比，更具有应用前景。然而目前有关黑大蒜对机体免疫功能影响国内外尚未见报道。为此，本实验应用自

4、制的黑大蒜提取物溶液，腹腔注射给小鼠，观察了黑大蒜提取物作为免疫调节剂的作用，为黑大蒜的实际应用进一步提供理论和实验依据。实验材料一、主要试剂黑大蒜提取物(干粉，由日本弘前大学佐佐木甚一教授惠赠)，RPMI1640培养基，小牛血清，O．0lMPBS缓冲液，红细胞裂解液，LDH底物液，Griess试剂，IL．2、玎附吖、IL．4、TNF．aELISA试剂盒。二、实验动物BALB／e小鼠，6．8周龄，SPF级，购自中科院上海实验动物中心。黑大蒜提射后的1—7天，从第1组开始，每天处死一组小鼠，第8组小鼠于第7天处死。二、样品的采集与检

5、测1、脾细胞分离及其悬液的制备颈椎脱位处死小鼠，常规制备脾细胞悬液，调整细胞浓度至1x107／ml。2、ELISA法检测脾细胞培养上清中Thl细胞因子IL．2、TNF．0【、IFN-),以及Th2细胞因子IL．4的水平3、LDH释放法检测NK细胞的杀伤活性4、Griess法检测脾细胞培养上清中NO水平5、RT．PCR半定量技术检测脾细胞FasLmRNA的表达水平三、统计学处理实验数据经SPSSl6．0统计分析软件应用t检验进行统计处理，P<0．05有显著性差异。结果1、NK细胞杀伤活性的检测结果在连续5天给予BALB／c小鼠注射黑

6、大蒜提取物后，比较实验组和对照组小鼠的NK细胞杀伤活性，结果表明：与对照组(5．824-1．38％)相比，黑大蒜提取物处理4-6天后，实验组小鼠的NK细胞杀伤活性显著性升高，并在第5天达到峰值(11．214-1．17％)，随后下降。2、脾细胞培养上清中细胞因子水平的检测结果本实验中我们检测了Thl型细胞因子IL．2、IFN-7和TNF．仅和Th2细胞因子IL-4的分泌水平。我们发现在给予小鼠连续注射5天黑大蒜提取物后，IL．2的分2从黑大蒜提取物处理后的第3天到第7天，实验组小鼠N02。始终处于较高的水平，与对照组相比(11．58

7、+0．86州)，均具有显著性差异(尸<0．001)。4、脾细胞FasLmRNA表达水平的检测结果通过半定量RT．PCR技术检测了小鼠脾细胞FasLmRNA的表达水平。处理结束后的第l天至第7天，各天脾细胞FasLmRNA的表达水平与对照组相比均未见显著性差异(尸>0．05)。结论1、黑大蒜提取物可以增强NK细胞的杀伤活性。2、FasLmRNA的表达水平并未增高，提示黑大蒜提取物未诱导杀伤细胞通1过Fas／FasL途径发挥效应。3、黑大蒜提取物可使脾细胞NO的分泌水平明显增高，提示黑大蒜提取物可能有增强固有免疫细胞巨噬细胞活性的作用

8、。4、黑大蒜提取物能增强IL．2、IFN-q,、耵盯．仅的产生水平，提示黑大蒜提取物能够促进Thl型免疫应答。关键词黑大蒜；FasLNK细胞；Thl／Th2细胞因子；NO3泌的在组3(照但pressureandbloodsugar,anti-can