牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用.doc

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1、牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用【摘要】目的探讨牛大力多糖对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法采用环磷酰胺和荷瘤的方法建立免疫抑制小鼠动物模型，小鼠以灌胃的方法给予不同剂量牛大力多糖，利用MTT检测淋巴细胞转化及巨噬细胞吞噬中性红实验，分析牛大力多糖对免疫抑制小鼠的影响。结果牛大力多糖可增强吞噬细胞的吞噬功能，增加抗体形成细胞的数量，促进淋巴细胞转化。结论牛大力多糖明显具有增强小鼠免疫功能的作用，以高剂量组效果最为显著。【关键词】牛大力多糖；环磷酰胺；荷瘤；免疫调节Abstract：ObjectiveToinvestigateimmunoregulatory

2、activityofpolysaccharideofNiudali(NDLS)onimmunosuppressedmice.MethodsThemodelsofimmunosuppressedmicewereestablishedbytreatingwithcyclophosphamideandtumor-bearing.DifferentdosesofNDLSwereorallyadministeredtothemice.MTTmethodwasusedtoobservetheproliferationoflymphocytesandthefunctionofma

3、crophagesinabdominalactivitywasalsomeasured.Spectrophotometrywasadoptedtoevaluatetheabilityofplaqueformingcells.ResultsNDLSenhancedthefunctionofmacrophage,increasetheamountofplaqueformingcells,andpromotetheproliferationoflymphocytes.ConclusionNDLScanenhancetheimmunofunctionofimmunosupp

4、ressedmice.Keywords：polysaccharideofNiudali;cyclophosphamide;tumor-bearing;immunoregulation牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤（MillettiaspecisoaChamp），以根入药，始载《花草药性备要》全年可采。以秋季挖根为佳。其性平，味甘，归肺、肾经。具有补虚润肺、强筋活络的功能，药理研究表明其对实验小鼠B淋巴细胞分泌特异抗体及T淋巴细胞产生白介素-2具有免疫调节作用［1］。但是对于牛大力的化学成分及其生物活性少有报道，本实验研究了牛大力多糖（NDLS）对环磷酰胺(Cy)

5、和荷瘤所致免疫功能低下小鼠的免疫调节作用，以期为牛大力的开发研究提供基础依据。1材料与方法1.1药物牛大力经南方医科大学中医药学院中药鉴定教研室陈兴兴鉴定，用无菌生理盐水配成所需浓度。1.2试剂与仪器4（1）试剂：1640培养液、MTT、ConA均为Hyclone公司产品。Cy为上海第十二制药厂产品。（2）仪器：DG3022型酶联免疫检测仪，华东电子仪器厂；721型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；5%CO2培养箱(WJ-3A)，上海跃进医疗器械厂。1.3动物KIH种小白鼠50只，体重18~22g，由南方医科大学实验动物中心提供，雌雄各半。1.4实验方法1.4.1

6、分组及给药KIH种小鼠50只，体重18~22g，雌雄各半，随机分为对照组、模型组、NDLS低中高剂量组(100、200、400mg/kg)，每组10只。对照组、模型组给予同容量的生理盐水，每天1次，连续10d。1.4.2造模［2］于给药第4天ip60mg/kgCy，建立免疫低下小鼠模型。无菌条件下抽取接种7d小鼠的腹水，用灭菌生理盐水1:3稀释，接种小鼠足趾皮下，0.2ml/只，于接种后第2天开始给药，10d后处死小鼠，建立荷瘤小鼠模型。1.4.3抗体形成细胞(PFC)的测定［3~4］采用溶血分光光度法，于给药第4天ip5%新鲜无菌绵羊红细胞(SRBC)悬液0.2m

7、l进行免疫，末次给药后1h处死小鼠，制备脾细胞悬液，取1×107脾细胞悬液、1:10豚鼠血清和0.2%SRBC各1ml混匀，37℃水浴1h，离心取上清，用721分光光度计在560nm处测吸光度。1.4.4淋巴细胞转化实验［5］给药结束后处死动物，无菌取脾，制备脾细胞悬液。将同一组细胞悬液混合，调细胞浓度为5×106/ml，取150μl细胞悬液加入96孔培养板，并加入50μlConA(终浓度2μg/ml)，置37℃5%CO2培养箱培养48h，弃上清，加MTT10μl孵育4h，每孔加酸化异丙醇100μl，用酶标仪在570nm处测定吸光度。1.4.5腹腔巨噬细胞吞噬功