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1、牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞增殖的双向调节作用郑元升，蒲含林，麻建军【摘要】目的从牛大力(MillettiaSpeciosaChamp.)提取纯化多糖，流式细胞术检测多糖对刀豆蛋白A(ConA)刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响，探讨牛大力多糖对免疫系统的调节作用机制，为临床用牛大力治疗多种慢性疾病提供理论和实验依据。方法提取、纯化牛大力多糖，利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测多糖对ConA刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响。结果终浓度为160μg/mL、800μg/mL、4mg/mL、20mg/mL的多糖对小鼠T淋巴
2、细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而终浓度为5、25、50、125μg/mL的多糖对小鼠T淋巴细胞增殖起促进作用,剂量依赖关系不明显。结论牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞的增殖呈双向调节作用。【关键词】牛大力；多糖；T淋巴细胞；CFDA-SE Abstract:ObjectiveThepolysaccharideMillettiaSpeciosaChamp.FloetryouselymphocyteproliferationstimulatedbyConA,themechanismoftheeffectsofpolysacchari
3、deontheimmunesystementalevidencefortheclinicalapplicationofMillettiaSpeciosaChampintreatingchronicdiseasesMillettiaSpeciosaChamp,CFDA-SEstainingandfloetryouselymphocyteproliferationstimulatedbyConA.ResultsThepolysaccharidehasthefunctiontoinhibittheproliferationof
4、lymphocyteofmousedependingonitsconcentrationL,800μg/mL,4mg/mL,20mg/mLinsubstrate,butpromotestheproliferationofTlymphocytesofmicelymphnodeattheconcentrationsof5,25,50,and125μg/mL,,butthedose-dependenteffectisnotsignificant.ConclusionThepolysaccharideextractedfromM
5、illettiaSpeciosaChamphasthetphocyteproliferationinmicelymphnodestimulatedbyConA. Keyp.;polysaccharide;Tlymphocyte;CFDA-SE 牛大力(MillettiaSpeciosaChamp.)又叫山莲藕、大力薯，豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤(MillettiaspeciosaChamp.)的干燥根〔1〕，主产于广东东部。牛大力用药始载于《生草药性备要》〔2〕，历史悠久，性味甘、平，具有补虚润肺、强筋活络的功用，临
6、床主要用来治疗肺热咳嗽、风湿性关节炎、腰肌劳损、胃溃疡、慢性肝炎、肺结核等疾病〔1〕。早在20世纪70年代，牛大力作为壮腰健肾丸、强力健身胶囊的原料已用于中成药的生产〔3〕。目前，对牛大力免疫活性的研究有过报道〔4〕，但对其多糖药理活性尚未见报道。本文提取、分离、纯化牛大力多糖，鉴定多糖主要的理化性质，并利用CFDA-SE染色、流式细胞术研究多糖对刀豆蛋白A(ConA)引起的T淋巴细胞增殖的影响,为阐明其对免疫系统的影响及临床治疗多种疾病提供理论和实验依据，为牛大力的进一步开发利用提供科学依据。 1材料 1.1动物雄
7、性SPF级Balb/c小鼠,4～5周龄,体质量(12±2)g,由中山大学动物所提供(合格证号00A005)。 1.2试药与仪器 牛大力购自广州天河石牌东百康源大药房，经鉴定为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤(MillettiaSpeciosaChamp.)的根；Vy-brantTMCFDA-SECellTracerKit(c-1288)购自美国MolecularProbes公司；ConA、RPMI-1640、胎牛血清、L-谷氨酰胺、β-二巯基乙醇均购自美国Sigma公司；FAC-SCalibur流式细胞仪,为美国Becto
8、nDickinson公司产品；旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器厂。 2方法与结果 2.1牛大力多糖的理化性质测定 2.1.1牛大力多糖的提取和纯化称取新鲜干燥的牛大力切片800g，粉碎，用6倍量的水，加热到90℃煮1h，过滤，再加5倍量的水,煮1h后过滤，再重复1次，合并3次的滤液，旋转蒸发浓缩，向浓缩液中加入无
