glp-2对lps活化巨噬细胞的调节作用及其机制

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1、GLP-2对LPS活化巨噬细胞的调节作用及其机制TheeffectandmechanismofGLP-2onLPS-activatedmacrophages作者姓名：谢姗栅专业名称：动物学指导教师：刘殿峰教授学位类别：理学硕士答辩日期：2015年6月5日本研究资助项目国家自然科学基金课题（31272390）NationalNatureScienceFoundationofChina（31272390）吉林省自然科学基金课题（201215036）NatureScienceFoundationofJilinProvince（201215036）中文摘要GLP-2对

2、LPS活化巨噬细胞的调节作用及其机制胰高血糖素样肽-2（glucagon-likepeptide2，GLP-2）是由肠道L内分泌细胞分泌的由33个氨基酸组成的单链多肽，主要通过GLP-2R发挥生物学作用。GLP-2能增加肠道血流量，促进小肠生长、营养物质吸收，抑制胃肠动力和胃酸分泌，降低肠道通透性等作用。在非甾体类抗炎药物诱导的小鼠肠炎模型中，GLP-2具有降低肠炎小鼠的死亡率，降低炎性因子表达等作用。巨噬细胞是先天免疫的重要组成细胞，通过表面模式识别受体识别结合、进而吞噬和清除入侵的病原体或凋亡细胞。当炎症发生时，巨噬细胞分泌不同功能的细胞因子参与炎症反应。

3、然后，过度释放促炎细胞因子会导致多种疾病的发生，如感染性休克、风湿性关节炎和其他慢性炎症性疾病。LPS为革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分，与LBP、CD14结合形成LPS-LBP-CD14三联复合物作用于巨噬细胞表面的TLR4，从而活化MAPKs和NF-κB两条信号通路，诱导相关靶基因的转录，释放IL-1β、TNF-α、IL-6等促炎细胞因子。研究报道中指出GLP-2具有减轻炎症的作用，而巨噬细胞在炎症反应中扮演着重要的角色，本研究探讨了外源性GLP-2对LPS活化的小鼠腹腔巨噬细胞的调节作用及其调节机制。本实验首先通过腹腔注射巯基乙酸盐肉汤的方法，分离培养BA

4、LB/c小鼠腹腔巨噬细胞；再通过qRT-PCR、Westernblot和ELISA方法检测GLP-2对LPS活化的巨噬细胞中促炎酶（iNOS和COX-2）和促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α和IL-6）mRNA和蛋白表达水平的影响；然后，进一步通过Westernblot方法检测了GLP-2对LPS活化的巨噬细胞中相关信号通路蛋白ERK、p38MAPK、JNK和IκB-α的磷酸化水平和NF-κB核转位的影响，从而研究GLP-2对LPS活化巨噬细胞的调节作用及其机制。-9-8-7-6本研究结果显示：1）GLP-2（10、10、10、10M）能降低LPS活化的巨噬

5、细胞中iNOS、COX-2、IL-1β、TNF-α和IL-6mRNA表达水平，以及细胞中iNOS、COX-2蛋白表达水平和细胞培养上清中TNF-α和IL-6的蛋白表达水-6平，GLP-2浓度为10M时，抑制作用最显著。表明所选浓度的GLP-2可以有效降低由LPS介导活化的腹腔巨噬细胞促炎酶和促炎细胞因子的表达，具有明显减轻炎症的作用。2）Westernblot结果显示GLP-2能够显著抑制LPS介导活I化巨噬细胞中ERK和IκB-α的磷酸化，抑制NF-κB的核转位。本研究表明，GLP-2通过抑制LPS活化巨噬细胞MAPKs信号通路中ERK的磷酸化和抑制NF-κ

6、B信号通路，从而抑制促炎酶和促炎细胞因子的表达。关键词：GLP-2；巨噬细胞；促炎细胞因子；信号通路IIAbstractTheeffectandmechanismofGLP-2onLPS-activatedmacrophagesGlucagon-likepeptide2(GLP-2),a33-aminoacidpeptide,issynthesizedinthegastrointestinaltractintheL-cellsofthesmallintestineandcolon.GLP-2exertsitsbiologicalactivitythrought

7、heGproteincoupledreceptor.GLP-2canincreasetheintestinalbloodflow,promotethegrowthofthesmallintestineandthenutrientabsorption,inhibitthegutmotilityandgastricacidsecretionandreducetheintestinalpermeability.AndGLP-2canimprovesurvivalandreducecytokineexpressioninthesettingofexperimental

8、murinenonsteroidala