trim22对lps诱导巨噬细胞促炎细胞因子负向调节作用

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1、上海交通大学医学院博士毕业论文TRIM22对LPS诱导巨噬细胞促炎细胞因子的负向调节作用摘要TRIM(tripartite．motifprotein，TRIM)家族因具有RBCC结构而得名，RBCC结构有三部分组成，RING结构域、B．box结构域矛NCoiled．coil结构域。已知人的TRIM家族有70多个成员，具有重要的抗病毒作用，并参与细胞的增值、分化、肿瘤发生、凋亡及转录等方面的调节【l一钉。LPS是G一杆菌细胞壁的重要成分之一，是主要的Toll样受体4(Tolllikereceptor4，TLR41的激动剂[5】oTLR4结

2、合LPS后，经过一系列的信号传递可以激活关键位点TAKl，导致转录因子NFvd3的活化，诱导促炎细胞因子的产生【6】。而接头蛋白TAB2和TAB3在LPS激活TAKl的信号通路中具有重要的衔接作用f7，81。我们前期研究发现，小鼠TRIM300t可以降解TAB2和TAB3，抑制转录因子NFvd3的活化，减少LPS诱导的巨噬细胞促炎细胞因子的产生，在LPS耐受中发挥重要的作用【9】。TRIM300t的表达有种属特异性，人的基因组中并不存在TRIM30c≈，在众多人TRIM家族中是否有成员类似与TRIM30et的生物学功能，目前尚不清楚。通

3、过生物信息学分析，我们发现TRIM22与TRIM30cx的核酸序列有较高的同源性，为61．32％。在Hela细胞、树突细胞及单核巨噬细胞受LPS或干扰素刺激后，均可诱导TRIM22的表达[10-12】。在此基础上，我们进一步深入探讨TRIM22是否具有类似于TRIM300t降解TAB2和TAB3的作用，以及对LPS诱导巨噬细胞产生促炎细胞因子的影响，并获得以下发现：1．TRIM22与TAB2存在内源性和外源性相互作用。过表达TⅪM22能降低TAB2的表达，而另一个同源物TRIM5a对TAB2的效果不明显。TRIM22对TAB2和TAB3

4、的降解作用呈剂量依赖性。上海交通大学医学院博士毕业论文2．TRIM22可以通过溶酶体途径降解TAB2，并且其SPRY结构域在降解过程中发挥关键作用。3．双荧光素酶检测发现，TRIM22呈剂量依赖性的抑制TAB2或TAB3诱导的NFvd3报告基因活化。在U937细胞分化的巨噬细胞中，转染TRIM22特异性siRNA，并用IFNot预处理，LPS束I]激巨噬细胞时，“沉默”TRIM22组n师仅和IL6的产生明显高于对照组。相反，通过MSCV逆转录病毒系统，在U937单核细胞株中过表达TRIM22。在LPS束IJ激时，高表达TRIM22组WN

5、Fot和IL6的产生明显少于对照组。综合以上研究结果说明，TRjM22能通过溶酶体途径降解TAB2和TAB3，负向调控LPS诱导的NF．vd3信号通路，从而抑制巨噬细胞促炎细胞因子的产生。关键词：TRIM22，负向调控，干扰素，TLR信号通路，促炎细胞因子，TAB2上海交通大学医学院博士毕业论文TIUM22NEGATIVELYREGULATESLPS—INDUCEDPRO扑ⅢLAMMATORYCYTOKINESEXPRESSIONINmMANMACROPHAGEABSTRACTThetripartitemotif(TRIM)family

6、ofproteinsarecharacterizedbythepresenceofRBCCstructureconsistingofallN-terminalRING(ReallyInterestingNewGene)fingerdomainfollowedbyoneortwoB—boxes(B)domainandapredictedcoiled—coil(cc)domain．Interestingly,anincreasingnumberoftheTRIMproteinsareimplicatedinantiviralresponse

7、associatedwithinnateimmunityandvariouscellularprocesses，includingcelldifferentiation，proliferation，oncogenesis，apoptosisandtranscription．LPS，acomponentofthegram-negativebacterialcellwall，aretheprincipalagonistsforTLR4．LPSbindingtoTLR4drivesanintracellularsignalingpathway

8、thatleadstoactivationofNF-rd3throughakeynode，TAK1，andsubsequentlyinducestheexpressionofproinflammatoryc