资源描述：
《dats通过nf-κb抑制lps诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达?1580?,中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2007Dec;23(12):1580-4DATS通过NF.KB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达朱桂军,李淑瑾,胡振杰,于占彪,张玉想,张勇(1,河北医科大学第四医院ICU,河北石家庄050011;2,河北医科大学法医学系,河北石家庄050017;3.河北大学附属医院ICU,河北保定071000)中国图书分类号:R一332;R284.1;R329.24;R341,31;R392.11;R563;R977,6文献标识码:A
2、文章编号:1001—1978(2007)l2—1580一o5摘要:目的探讨二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF—d)及白介素一l13表达的信号转导机制.方法体外培养MH—S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预.反转录PCR检测细胞中TNF-d,IL—l13mRNA表达,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测细胞核因子一KB(NF—KB)活性,Westernblot检测细胞磷酸化(P—IKB)及非磷酸化IKB的表达.结果LPS刺激MH—S细胞可导致TNF_d,IL—l13mRNA,p-I~B表达增加及NF—KB活性升高.用DATS(0.1,0,
3、5,2.5,5.0mg?L)预处理细胞3Omin后再给予LPS刺激,可使TNF-d,IL—l13mRNA表达降低,并呈剂量依赖性;升高的NF—KB活性及p-I~B表达均显不同程度的抑制.单独DATS对TNF—d,IL—l13mRNA表达及NF—KB活性无影响.结论DATS可通过抑制IKB磷酸化及NF—KB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF—d,IL—l13mRNA表达.关键词:二烯丙基三硫;脂多糖;肺泡巨噬细胞;细胞因子;核因子一KB二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)是大蒜提取物的主要有效成分,具有多种药理作用,如抑制血小板聚集从而预防动脉粥样硬化,
4、抑制癌细胞增生促进癌细胞凋亡,抗氧化作用等¨J.我们前期研究表明,DATS可减轻脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acutelunginjury,Au)小鼠肺组织炎症反应及肺水肿程度,对血清及肺组织中的肿瘤坏死因子一Ot(tumornecrosisfactor—,TNF—)及白介素一1B(interleukin一1B,IL一1B)的生成具有抑制作用HJ,并可下调LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细收稿日期:2007—07—12,修回日期:2007—10—08基金项目:河北省科技攻关资助项目(No05276101D-65)作者简介:朱桂军(1972一),男,博士
5、,副主任医师,硕士生导师,E-mail:guijunl0@sina.com;胡振杰(1964一),男,博士,主任医师,教授,硕士生导师,研究方向:急性肺损伤的防治,通讯作者,Tel:031l-86095367,E-mail:syicu@rip.sina.com胞株MH—S细胞TNF—,IL一1B的生成及表达,表现出一定的抗炎作用J.但其作用机制尚不明确.研究显示,NF—KB在LPS诱导的TNF—及IL一1B基因表达中起关键作用J.因此,本实验主要在细胞水平探讨DATS的抗炎效应是否与调控NF—KB活性有关.1材料与方法1.1小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞的培养及处理MH—S细胞(购自美国
6、ATCC公司)在含10%胎牛血清,100U?ml青霉素及100mg?L链霉素的RPMI1640培养基中培养.用LPS1mg?L(0111:B4,美国Sigma公司)和(或)不同浓度的DATS(江苏正大天晴药业,国药准字:H32025639)孵育细胞一定时间.1.2RT-PCR测定细胞因子mRNA表达用TR—Izol试剂(北京赛百盛生物公司)提取细胞总RNA.取总RNA4g,在逆转录酶(Promega公司)作用下,用随机引物合成cDNA.在含有2mmol?LMgCl:,1UTaqDNA聚合酶(上海生工生物公司)及25pmol细胞因子特异性引物的25l反应体系中,进行cDNA的聚合酶链式反应
7、.以B—actin为内参对照.PCR循环参数为:预变性94~C3min;变性94℃45S;复性51.8℃45s(TNF.),52oC45s(IL一1B),55℃45s(B.actin);延伸72℃45S;35次循环后进一步延伸72~C5min.TNF—上游引物5一AGCCGATGGGrlq"GTA一3,下游引物5一AcrI3"一GGGCAGATTGA一3,扩增产物266bp;IL一1B上游引物5一GCrITI℃AGGCAGGCAGr
