hjb-1对lps诱导的巨噬细胞活化及小鼠急性肺损伤的抗炎保护机制研究

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1、HJB-1对LPS诱导的巨噬细胞活化及小鼠急性肺损伤的抗炎保护机制研究InvestigationoftheprotectiveeffctofHJB-1onLPSinducedmacrophagesactivationandacutelunginjuryofmice作者姓名：潘垒昌专业名称：预防兽医指导教师：孙万春副教授学位类别：农学硕士论文答辩日期：2015年6月2日中文摘要HJB-1对LPS诱导的巨噬细胞活化及小鼠急性肺损伤的抗炎保护机制研究炎症是机体抵抗有害刺激而作出的保护性应答和修复损伤组织的过程。适当的炎症应答对于机体抵御病原微生物的入侵和修复损伤是

2、有利的，但是当炎症应答过于强烈时则会导致组织损伤和疾病。巨噬细胞释放促炎或具有细胞毒性的细胞因子、生物活性脂类、生长因子、水解酶等来调节细胞做出相关应答。脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌外壁的重要的组成部分，在与细胞表面的CD-14分子和Toll样受体4以及MD-2等分子相互作用下，活化单核细胞/巨噬细胞。进而导致第二信使和相关信号转导通路启动。其中包括NF-κB信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路。狼毒，在中医中被用于治疗癌症、水肿、腹水病已有相当长的历史。植物化学的研究已经证明，狼毒包含二萜类化合物、三萜类化合物等。其中包括三种二萜类化合物JA

3、、JB和17-OH-JB（HJB）。近期研究显示，JA、JB和HJB具有良好的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞系都有良好的抗肿瘤活性，比如恶性间叶肿瘤180（Sarcoma180）、小鼠艾丽西腹水癌（Ehrlichascitescarcinomainmice）。一些体外研究进一步的显示JB和HJB诱导人类白细胞系HL-60（Humanpromyelocyticleukemiacellline）、K562（Humanbreastcarcinomacellline）、MCF-7（MichiganCancerFoundation-7）凋亡。Uto等人发现JB、HJB及H

4、JA具有一定抗炎作用，HJB抗炎活性较另外两者强，通过化学结构差异分析，发现JB类化合物中17位碳原子的羟基基团能显著增强抗炎作用，说明对化合物进行化学修饰有可以增强其抗炎作用。本研究旨在探究HJB的衍生物HJB-1在LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞和LPS诱发的ALI的抗炎作用。在本研究中，通过化学修饰HJB17位碳原子中的羟基得到HJB的两个衍生物HJB-1和HJB-2。在LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型中，HJB-1能更有效的抑制LPS诱导的TNF-α的释放。同样HJB-1能以浓度依赖的方式减少LPSI诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2及

5、iNOS的mRNA表达，但不改变具有抗炎作用的IL-10的mRNA的水平。此外还能抑制LPS诱导的NF-κB和MAPK激酶的活化。急性肺损伤（ALI）是一种具有很高致死率的烈性炎症性肺部疾病。ALI的典型特征为肺组织强烈的炎症应答，包括弥漫性肺泡损伤、上皮屏障破坏、肺泡壁组织损伤、肺水肿以及中性粒细胞浸润，进而导致大量促炎细胞因子的释放，包括肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）。目前对ALI的治疗策略主要是包括防护肺部换气和保守疗法。尽管针对ALI的发病机制及治疗手段已经进行了大量研究，但ALI的死亡率仍居高不下。因此

6、迫切需要探索创新疗法和有效药物。用LPS鼻腔滴注的方法建立雄性C57BL小鼠ALI模型。在滴注LPS前1小时给予剂量为10mg/kg和2mg/kg体重的HJB-1，之后采集肺泡灌洗液和肺组织样本。HJB-1预处理组肺湿干重比下降，显示HJB-1能减轻LPS诱发的肺水肿。同时HJB-1显著减少ALI小鼠肺泡灌洗液中的白细胞总量和总蛋白量，并且HJB-1还明显抑制LPS引起的ALI小鼠肺组织样本髓过氧化物酶（MPO）活性增加。HJB-1能抑制LPS诱导巨噬细胞等天然免疫细胞分泌大量细胞因子，包括TNF-α、IL-1β和IL-6。肺组织切片结果显示，HJB-1抑制

7、LPS诱导的肺泡壁变薄、肺出血和白细胞浸润。此外，肺组织研磨液的Westernblot结果显示HJB-1能有效地阻断肺组织中由LPS诱导的MAPKs和NF-κB信号通路的活化。以上结果表明HJB-1能通过抑制NF-κB活化和MAPK的磷酸化起到抗炎效果，同时提示修改HJB的17碳原子上的羟基可以增强HJB系列化合物的抗炎作用。此外HJB-1能抑制LPS诱导的小鼠ALI中的MAPK和NF-κB信号通路，从而减少组织损伤和控制炎症发展，有望从传统中草药中开发一种新的治疗ALI的药物。关键词：HJB-1、LPS、巨噬细胞、细胞因子、信号通路、炎症、急性肺损伤IIA

8、bstractInvestigationofthep