柴胡多糖对巨噬细胞免疫功能的调节及对tlr4信号通路的影响

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1、I奴#硕士学位论文柴胡多糖对巨噬细胞免疫功能的调节及对TLR4信号通路的影响EffectsofBupleurumpolysaccharidesontheimmunologicfunctionandTLR4signalingpathwayofmacrophages导师章蕴毅副教授指导教师小组成员力弘副教授翁鸿博讲师目录摘要iAbstractiv前言14柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞唆和分泌功能的调节41##52实验方法103实验结果122428柴胡多糖对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TLR4信号通路的影响281册

2、292实验方法...34337447全文小结5152参考文献53Toll样受体4介导的天然免疫应答与效应62缩写词Abbreviation74在校期间研究成果75蘭76y柴胡多糖对巨噬细胞免疫功能的调节及对TLR4信号通路的影响摘要巨噬细胞起源于骨髓前体细胞，是广泛分布于全身的免疫细胞。巨噬细胞具有组织特异性，如肝脏中的枯否细胞、脑中的小神经胶质细胞，腹腔中的巨噬细胞、肺中的肺泡巨噬细胞以及骨中的破骨细胞等，是由巨噬细胞分别定位于不同组织而形成的。活化的巨噬细胞吞噬能力增强，可以直接通过吞噬或者通过分泌炎性细胞因子(如

3、TNF-a、IL-6和IL-ip)、活性氧和NO等抗病原介质间接杀死病原体，有效防御因病原体侵害而引起的炎症反应和组织损伤，是机体抵抗病原微生物感染的第一道防线，在天然免疫中起重要作用。巨噬细胞在天然免疫系统中通过其表面的天然免疫识别分子(模式识别受体)特异地识别病原体的一些保守分子结构(病原体相关分子模式)，从而有效地感知病原微生物的入侵并诱导机体免疫应答。细菌脂多糖(LPS)是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，是导致炎症反应的主要根源之一。Toll样受体(TLRs)作为识别病原体相关分子模式的关键天然免疫受体，在宿主防御系统中发挥重要作用。TLRs主要在单核

4、细胞和树突状细胞表达。每种TLR可识别的病原分子有限，其中TLR4主要通过识别LPS并介导其信号转导而调控炎症反应，清除外来异物。柴胡为伞形科多年生草本植物，是我国传统中药，包括北柴胡chinenseDC)和小叶黑柴胡smithiivar.parvifolium),具有抗炎及免疫调节作用。其中小叶黑柴胡主要分布于我国西北地区。本实验所使用的柴胡多糖(BPs)即是从小叶黑柴胡根部提取出来的。课题组前期研究表明：（1)小鼠灌胃给予柴胡多糖可促进腹腔巨噬细胞吞噬自身凋亡细胞、抗体介导的绵羊红细胞(IgG-SRBC)和鸡红细胞(CRBC)，但却抑制LPS诱导的腹腔

5、巨噬细胞分泌NO、TNF-a、IL-6和IL-1(3;(2)在气管滴注LPS诱导建立的急性肺损伤(ALI)模型中，柴胡多糖能缓解肺部病理损伤，并能抑制补体过度激活和减少肺部组织中补体活化产物的沉积。鉴于以上我们已有的药效学研究成果，在本实验中，我们观察柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬和分泌功能的作用，分析柴胡多糖对巨噬细胞的免疫调节作用；另外，鉴于TLR4信号转导在单核巨噬细胞发挥的重要作用，研究柴胡多糖对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TLR4信号通路的影响，深入探讨柴胡多糖抑制炎症反应的作用机制，以进一步了解柴胡多糖治疗ALI的可能靶点。柴胡多糖对巨噬细胞免

6、疫功能的调节及对TLR4信号通路的影响1柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬和分泌功能的调节目的研究柴胡多糖对腹腔巨噬细胞吞噬和分泌功能的作用，进而探讨其对单核巨噬细胞的免疫调节功能方法（1)BPs对巨噬细胞吞噬功能的影响：Balb/c小鼠随机分为6组，正常对照组、BPs(10、20、40、80ng/ml)处理组、地塞米松(Dexl^M)处理组。巨噬细胞给予柴胡多糖或地塞米松作用30分钟，加入FITC突光标记的Escherichia.coli(E.coli)或者生物颗粒与巨噬细胞共培养，检测巨噬细胞吞噬荧光颗粒的平均荧光强度并计算吞噬百分率；（2)BPs对巨噬细

7、胞分泌功能的影响：Balb/c小鼠随机分为15组，正常对照组、BPs(10、20、40、80gg/ml)处理组、LPS(lpg/ml)刺激组、BPs各剂量与LPS联合处理组、多粘菌素B(PMB，l^ig/ml)处理组、经多粘菌素B预处理的BPs各剂量组。小鼠腹腔巨噬细胞给予不同药物作用24h，Griess法和ELISA法分别检测巨噬细胞在未受刺激及受LPS刺激下，BPs对巨噬细胞分泌NO和细胞因子TNF-a、IL-6、IL-ip、IL-12p40、IL-10、IFN-p的影响。结果（1)BPs20、40、80pg/ml明显提高巨噬细胞吞噬五.co//但却显

8、著降低其吞噬Z.A的平均荧光强度和吞噬百分率(P<0.05)。(2