去甲肾上腺素诱导人巨噬细胞MMP-9的表达及机制

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1、去甲肾上腺素诱导人巨噬细胞MMP-9的表达及机制李明1，孙守兵1，周越1，庞晓明2，席娟3，金泰宇4，姚文平5*（1．222000江苏连云港连云港市中医院药学部，南京中医药大学连云港附属医院；2.710061陕西西安西安交通大学药理学系；3.272029山东济宁济宁医学院附属医院；4.222000江苏连云港连云港市第二人民医院；5.222000江苏连云港连云港市中医院针灸科；）中国图书分类号：R332摘要：目的观察去甲肾上腺素（NE）预处理人巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达及其致动脉粥样硬化机制。方法：体外培养的U937巨噬细胞，用不同浓度(10-1

2、0、10-9、10-8、10-7M)及不同时间（0、1、3、6、12、24h）的NE分别刺激U937巨噬细胞。RT-PCR法测细胞MMP-9mRNA水平，Westernblot法检测细胞MMP-9蛋白表达，ELISA法测细胞培养液上清中MMP-9蛋白水平的表达。此外，预先加入抗氧化剂NAC(10mM）和NAD(P)H氧化酶抑制剂DPI(10-5M)孵育1小时后再用不同浓度的NE分别刺激细胞24h，用荧光探针法检测细胞内ROS的生成；同时用RT-PCR及ELISA法检测细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果：NE浓度时间依赖性地增加巨噬细胞MMP-9mRNA及蛋白

3、表达，同时NE也可浓度依赖性地诱导细胞ROS的生成。此外，NAC和DPI都一定程度的抑制了MMP-9的表达。结论：NE浓度和时间依赖性地诱导人巨噬细胞U937MMP-9的表达，并且此诱导作用是通过了NAD(P)H氧化酶介导的ROS通路而促进炎症反应，促进AS的发生发展。关键词：去甲肾上腺素；巨噬细胞；基质金属蛋白酶-9；动脉粥样硬化通讯作者：姚文平，Tel:18352813170，Email：liminglm1985@163.com12Norepinephrineinducedexpressionofmatrixmetalloproteinase-9inhuman

4、macrophagesanditsmechanismsLiMing1,SunShoubing1,ZhouYue1,PangXiaoming2,XiJuan3,JinTaiyu4,YaoWenping5*（1.222000JiangsuLianyungangDepartmentofPharmacy，LianyungangHospitalofTraditionalChineseMedicine;2.710061ShanxiXi’anDepartmentofPharmacology,Xi’anJiaotongUniversitySchoolofMedicine;3.27

5、2029ShandongJiningAffiliatedHospitalofJiningMedicalCollege;4.222000JiangsuLianyungangTheSecondPeople'sHospitalofLianyungang;5.222000JiangsuLianyungangDepartmentofAcupunctureandmoxibustion,LianyungangHospitalofTraditionalChineseMedicine）ABSTRACT:AIMToinvestigatetheeffectsofnorepinephri

6、ne（NE）onmatrixmetalloproteinase-9(MMP-9)inhumanmacrophagesandexploreitspro-inflammatoryandpro-atheroscleroticmechanisms.METHODS:MurineU937macrophageswereculturedandstimulatedwithdifferentconcentrations(10-10、10-9、10-8、10-7M)anddifferenttime(0、1、3、6、12、24h)ofNE.MMP-9mRNAlevelswereanaly

7、zedbyRT-PCR,MMP-9proteinexpressionwasmeasuredbyWesternblotandMMP-9proteinexpressioninthesupernatantwasdetectedbyELISA.Inaddition,thecellswerepretreatedwithantioxidantNAC(10mM）andNAD(P)HoxidaseinhibitorDPI(10-5M)for1hpriortostimulationwithdifferentconcentrationsofNEfor24h.Then,intracel

8、lular