lps诱导巨噬细胞活化过程中pim-1表达及调控通路的研究

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1、中图分类号—咝万方数据UDC61O硕士学位论文学校代码密级10533LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim．1表达及调控通路的研究ExpressionofPim--1andrelatedregulatingsignalingpathwaysinLPS-inducedactivatedmacrophage作者姓名：肖明亚学科专业：临床医学研究方向：内科学学校(系、所)：湘雅医院指导老师：徐美华副教授论文答辩日期矽·啦艾力z答辩委员会主席中南大学湘雅医院二0一四年五月万方数据学位论文原创性声明lIllllllltlllMIILll

2、lllllllklllllllllllUlllllIY2685695本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：二盈坐学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规

3、定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：导师签名：万方数据本文章受以基金项目资助：★国家自然科学基金青年基金项目(项目批准号：81200277)★湖南省卫生厅科研基金课题(项目批准号B2012．133)万方数据LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim．1表达及调控通路的研究摘要目的：探讨LPS诱导巨噬细胞活化过程中，Pim

4、．1的动态表达情况及抑制P13K、P38MAPK、MEKl／2、JAK2信号关键分子对巨噬细胞中Pim一1表达的影响。方法：分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，随机分为7组，各组分别用11．tg／mlH匕多糖(LPS)处理Oh，lh，2h，4h，8h，12h，24h，禾lJmq．RTPCR、Westernblot技术检测各组巨噬细胞中Pim—lmRNA及Pim．1蛋白的动态表达情况。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，随机分为6组，各组分别用LPS，DMSO+LPS，LY294002(P13K抑制剂)+LPS，SB203580(P38MAPK

5、抑带0剂)+LPS，AG490(MEKl／2抑带0剂)+LPS，U0126(JAK2抑制剂)+LPS处理细胞，利用Westemblot技术检测各特异性信号分子抑制剂对LPS诱导的巨噬细胞中Pim．1蛋白表达的影响。结果：①LPS,IJ激能迅速上调巨噬细胞中Pim．1mRNA水平，LPS刺激1h后即可检测到Pim．1mRNA表达增高，Pim．1mRNA高峰在LPS刺激2h出现，约是对照组的6倍，LPS束U激12h后Pim．1mIⅢA即回落至基础水平。(g)LPS束IJ激能迅速上调小鼠腹腔巨噬细胞中Pim．1蛋白的表达，LPS

6、束IJ激1h后即可检测到Pim一1蛋白表达增高；Pim一1蛋白水平在LPS束IJ激1．8h后维持增高水平，LPS束U激12h后Pim一1蛋白水平即回落至基础水平。@P13K抑制剂，P38MAPK抑制剂，MEKl／2抑制剂，III万方数据JAK2抑制剂分别下调巨噬细胞中p．AKT，p-P38，p-ERK，p-JAK2的表达，P13K、P38MAPK、MEKl／2、JAK特异性抑制剂均能下调LPS诱导的巨噬细胞中Pim．1蛋白表达水平。结论：①巨噬细胞中Pim．1mRNA及蛋白在LPS束[J激后迅速表达上调，体现Pim．1早期

7、即刻基因的特性。Pim．1在巨噬细胞早期活化过程中发挥调节作用。(④P13KJAKT、P38MAPK、MEK／ERK、JAK2／STATs信号通路均参与调控巨噬细胞中Pim．1的表达。【关键字]Pim．1；巨噬细胞；炎症反应；P13K；P38MAPK：JAK：MEKl／2万方数据ExpressionofPim-landrelatedreglatingsignalingpathwaysinLPS·-inducedactivatedmacrophageAbstractAIMS：Theaimsofthisstudyweretoe

8、xploretheexpressionofPim一1kinaseduringtheactivateprogressionofmacrophageandtoassesswhetherinfluencefourkeysignalingmolecules(P13K，P38MAPK，MEKl／2，JAK2)ma