prxⅰ在lps诱导小鼠免疫反应过程中的调控作用研究

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1、Universitycode：10223Classifiedcode：Q28Graduatenumber：XS1291010Confidentialdegree：publicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationRegulatoryfunctionofPeroxiredoxinIinmiceinflammatoryresponseinducedbyLipopolysaccharidePostgraduateFengLiSupervisor：Profess

2、or:CuiYu-dongLecturer:SunHu-nanMajor：CellBiologyResearchdirection：CellSignalingTransductionCollege：LifeScience&BiotechnologyDaqingChinaJune,2015摘要过氧化物还原酶I(PeroxiredoxinI,PrxI)是细胞内清除活性氧（ReactiveOxygenSpecies,ROS）的过氧化物酶，是过氧化物还原酶家族（Peroxiredoxinfimaly）成员之一。在过去的20年间人们对其

3、进行了广泛的研究，已有较为系统的了解。众多研究结果显示PrxI蛋白除了可以清除活性氧之外，还可以与细胞内诸多蛋白质相互作用，进而在细胞增殖、分化、凋亡、老化、以及癌症的发生、发展方面发挥重要的调控作用。近几年，尤其在肺癌的发生、发展和治疗过程中PrxI的作用受到了广大研究工作者的关注并且取得了系统的了解，但PrxI在免疫反应过程中的调节作用和炎症反应的调控作用还尚不清楚。为了探究PrxI在免疫反应过程中的新功能，本实验利用PrxI基因敲除小鼠和野生型小鼠研究PrxI在LPS诱导的败血性死亡过程中的调控作用。实验首先利用PrxI

4、基因敲除小鼠和野生型小鼠，检测PrxI基因的缺失在LPS诱导的小鼠死亡上的影响，然后利用组织病理学检测方法（组织H&E染色）找出与小鼠死亡相关的主要组织脏器，通过蛋白免疫印迹(Westernblot)和酶链免疫反应（ELISA）等分子生物学检测技术，阐明PrxI在LPS诱导的小鼠死亡过程中的保护机制。结果，在LPS腹腔注射后PrxI基因敲出小鼠与野生型小鼠对比死亡率显著增加；组织病理学检测（组织H&E染色）发现PrxI基因敲除小鼠与野生型小鼠对比，LPS腹腔注射后肝脏出现大面积细胞死亡现象；ELISA结果显示，LPS腹腔注射后

5、，PrxI基因敲除小鼠与野生型小鼠对比血清中IL-10的含量明显降低，肝脏组织上清液中TNF-a的含量显著升高；Westernblot检测结果，LPS腹腔注射后PrxI基因敲除小鼠肝脏组织中促进细胞凋亡蛋白Caspase3表达量明显上升，同时与ROS相关的SOD2、Catalase、GPx蛋白质的表达量也随之增加。以上结果表明，当机体受到LPS攻击时，PrxI基因的缺失会显著增加小鼠的死亡率，并且由于PrxI基因缺失引起的高死亡率直接与肝脏组织的大面积凋亡和肝脏中蓄积的ROS水平有关。因此，我们认为PrxI作为抗氧化物酶通过抑

6、制肝脏内活性氧水平的升高而起到保护机体免受氧化应激引起的损伤，可作为一种败血性死亡治疗剂靶向蛋白。关键词：脂多糖，过氧化物还原酶I，活性氧，炎症反应，基因敲除小鼠IAbstractPeroxiredoxins(Prxs)belongtoanimportantsuperfamilyofsmallnonselenoperoxidasesthatscavengehydrogenperoxideandorganichydroperoxide,andareessentialformaintainingreactiveoxygenspec

7、ies(ROS)homeostasis.Overthepast20years,extensiveresearchrevealsthatthePrxIproteinnotonlyhaveperoxidaseactivitybutalsoplaysaroleincellproliferation,differentiation,apoptosis,aging,andcancerbyinteractingwithnumbersproteins.Recently,thefunctionofPrxIinoncogenesisandcan

8、cerdevelopmenthasalsobeendefined.ButthepossibleregulatoryeffectofPrxIininnateimmuneresponsehasnotbeenclear.Inordertounderstandthefunctiono