nod1rip2信号通路对巨噬细胞炎性活化的调控

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1、目录一、摘要1(一)中文摘要1(二)英文摘要4二、正文7(一)前言7(二)材料和方法．9(三)结果15(四)讨论．．22(五)结论．．25(六)参考文献．．26三、综述28(一)综述28(二)参考文献．．34五、攻读学位期间发表文章情况36六、致谢37万方数据大连医科大学硕士学位论文NODl／RIP2信号通路对巨噬细胞炎性活化的调控硕士生姓名：侯亮指导教师：丁彦春教授指导小组：王秀丽教授张鹏强教授专业名称：内科学(心血管内科)摘要目的：本研究以人单核细胞株THP．1为基础，观察NODl／RIP2信号通路对巨噬细胞炎性活化以及表型变化的影响，探讨NOD1／RIP2信号通路在动脉粥样硬化形成

2、和发展中的作用机制。方法：分别用不同浓度(10、25、50mg／L)的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激THP-l源性巨噬细胞中24h，以50mg／L浓度的ox-LDL分别刺激T}{P—l源性巨噬细胞(8、16、24h)，以空白组作为对照。应用荧光实时定量PCR检测THP．1源性巨噬细胞中NODl、RIP2mRNA表达；应用Westernblot检测细胞中NODl、RIP2蛋白表达；应用ELISA检测细胞肿瘤坏事因子．a(TNF．Q)、单核细胞趋化蛋白．1(MCP-1)的分泌。设计3对RIP2siRNA，应用hiperfict转染试剂转染RIP2siRNA进入细胞。应用荧光实时定量PC

3、R检测THP．1源性巨噬细胞转染后RIP2mRNA的表达；应用Westernblot检测细胞转染后RIP2蛋白的表达，从而筛选最适siRNA转染浓度和最有效的一对siRNA。用最有效RIP2siRNA转染细胞后，50mg／Lox-LDL处理24h。应用ELISA检测TNF．Q、MCP．1的分泌；应用流式细胞术检测细胞表面抗原CD86表达；荧光实时定量PCR检测细胞白细胞介素10(IL．10)、白细胞介素12(IL一12)mRNA的表达。结果：OX．LDL能以剂量依赖和时间依赖的方式诱导巨噬细胞中NODl／RIP2信号通路的表达，随着OX．LDL刺激浓度的增加，NODlmRNA的表达增加(

4、对照组：I±0；10mg／L组：2．324-0．7；25mg／L组：4．37±1．36；50mg／L组：15．6±1．95，P<0．01)；同样RIP2mRNA的表达也增加(对照组：l±O；10mg／L组：3．454-0．98；25mg／L万方数据大连医科大学硕士学位论文组：7．62+0．92；50mg／L组：10．21±1．13，P

5、IP2蛋白(对照组：0．2±0．02；lOmgJL组：0．21±O．01；25mg／L组：0．85_+O．07；50mg／L组：1．52+0．09，P

6、对照组：0．41±O．03；8h组：1．63±0．12；16h组：2．27±0．11；24h组：2．86±0．15，P

7、0mg／L组：108．5+4．96pg／mL；25mg／L组：127．91±4．13pg／mL；50meJL组：163．4±7．22pg／mI。，P