咖啡酸在大鼠体内绝对生物利用度和其在肠道吸收特性探究

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1、咖啡酸在大鼠体内绝对生物利用度和其在肠道吸收特性探究［摘要］目的：研究咖啡酸在大鼠体内的绝对生物利用度及其在肠道的吸收特性。方法：大鼠分别采用静脉（2mg•kg-1）.灌胃（10mg・kgT）给药研究咖啡的绝对生物利用度；建立大鼠原位肠血管灌流模型研究咖啡酸在肠道的吸收率；采用Caco-2细胞模型研究咖啡酸的双向转运情况。结果：咖啡酸静脉（2mg•kg-1灌胃（10mg•kg-1）给药后，在大鼠体内的药动学行为均符合二室模型，咖啡酸的绝对生物利用度为14.7%；咖啡酸在肠血管灌流模型中的吸收率为12.4%；咖啡酸的PappAP—BL及PappBL—AP不随浓度的变化而变化

2、，且在实验浓度的范围内，PappBL—AP/PappAP-BL均大于2。结论：咖啡酸绝对生物利用度低，肠道吸收率少，在Caco-2细胞单层模型中的转运途径可能为主动转运。［关键词］咖啡酸；生物利用度；肠吸收率；通透性咖啡酸（3,4-二释基肉桂酸）是自然界中分布非常广泛的多酚类化合物，具有抗氧化、抗菌、抗癌等作用［1-3］o有研究报道，每天摄食一定量的咖啡酸可以预防肝癌、皮肤癌［4-5］o咖啡酸是咖啡酸片主要成分，临床上用于止血。据报道咖啡酸的代谢部位主要是小肠，经肠道细菌代谢［6］。咖啡酸在大鼠血浆中代谢物主要是葡醛酸结合物、硫酸结合物及少量的原型药物［7］。少有文献报道

3、咖啡酸的绝对生物利用度，因此，本文采用传统的体内法研究咖啡酸在大鼠体内的绝对生物利用，建立大鼠原位肠血管灌流法研究咖啡酸的肠吸收率及运用Caco-2细胞模型研究咖啡的通透性，旨为咖啡的临床应用提供理论指导。1材料咖啡酸（110885-200102）、肉桂酸（110786-200503）购自中国食品药品检定研究院；牛血清白蛋白购自齐云生物技术有限公司；DMEM培养基、胎牛血清、非必需氨基酸购自美国Hyclone公司；L-谷氨酰胺、胰蛋白酶，购自美国Sigma公司。乙睛为色谱纯，其他试剂均为分析纯。血管灌流Krebs-Ringerzs液的配制：称取NaCl7.8g,KC10.

4、35g,CaC120.37g,MgC120.22g,NaH2P040.32g,葡萄糖3.0g,NaHC031.37g,蒸馆水定容至1L,临用前加入5%牛血清白蛋白。HBSS溶液的配制：称取8gNaCl,0.4gKC1,1g葡萄糖，60mgKH2P04,47.5mgNa2HP04,调pH至7.2,加蒸馆水定容至1Lo4000QTRAP串联四极杆质谱仪（美国AppliedBiosystem公司）；LC-20AD高效液相色谱仪（日本岛津公司）；细胞培养箱（德国Hearous公司）；24孔Transwell培养板（美国Costar公司）；Millicell-ERS跨膜电阻仪（美国

5、Millipore公司）；飞鸽髙速离心机（上海安亭科学仪器厂）；HL-2D恒流泵（上海精科实业有限公司）。SD大鼠，雄性，体质量200〜250g,购自广州中医药大学实验动物中心，许可证号SCXK（粤）2008-0020o2方法2.1分析方法2.1.1色谱条件色谱柱为PhenomenexC18柱（2.0mmX50mm,5um）,柱温30°C；流动相A为甲醇-水（5:95）和10mmol•L-1醋酸铁，流动相B为甲醇-水（95:5）和10mmol•L-1醋酸铁;梯度洗脱程序如下：0〜0.5min,0%B；0.5〜0.8min,0〜100%B；0.8〜3.0min,100%B；

6、3.0〜3.2min,100%〜OB；3.2〜5.0min,0%B；流速0.2mL•min-1；进样量10uLo2.1.2质谱条件ESI离子源；MRM检测模式；检测离子为负离子[M-H]-；离子源温度550°C；离子喷雾电压-4500V；Gas1为0.379MPa；Gas2为0.379MPa；气帘气压0.138MPa；咖啡酸和内标肉桂酸的检测离子对分别为m/z:178.9/134.8,146.8/102.8O2.2咖啡酸体内药动学考察12只SD大鼠随机平均分成2组，分别为静脉注射组和灌胃组。静脉注射组大鼠按2mg•kg-1于股静脉注射给药,并与给药后0.083,0.167

7、,0.5,1,2,3,5,8,12h眼球后静脉丛采血0.5mLo灌胃组大鼠按10mg•kg-1的剂量灌胃给予咖啡酸,于给药后0.083,0.167,0.333,0.5,1,2,3,4,6,12h眼球后静脉丛采血0.5mLo分离血浆，甲醇溶液沉淀蛋白后低温保存(-20°C)待测。2.3大鼠原位肠血管灌流模型制备与检测大鼠原位肠血管灌流模型在原位肠肝血管灌流模型的基础上稍作修改［8-10］。大鼠20%乌拉坦(0.6mL-kg-1)麻醉后，腹部切口，结扎腹腔动脉与肝动脉，将上肠系膜动脉、右肾动脉和腹主动脉游离出来，用线围绕主动脉与右