2细胞株凋亡实验探究'--威灵仙皂苷诱导mr2细胞株凋亡实验探究

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1、2细胞株凋亡实验探究'〉威灵仙皂昔诱导MR2细胞株凋亡实验探究摘要：目的：研究威灵仙皂昔是否能够诱导早幼粒细胞白血病耐药细胞株MR2细胞凋亡。方法：WST1法观察威灵仙皂昔对MR2细胞的增殖抑制作用；用流式细胞仪观察MR2细胞的凋亡率。结果：威灵仙皂昔可明显抑制MR2细胞的增殖，诱导MR2细胞凋亡，且呈时间浓度依赖性。结论：威灵仙皂昔能够明显抑制早幼粒细胞白血病耐药细胞株MR2增殖和诱导MR2细胞凋亡，呈时间浓度依赖性；高浓度威灵仙皂昔对MR2细胞的效果与亚碑酸无统计学差异。关键词：威灵仙皂昔MR2细胞细胞凋亡【中图分类号】R4【文献

2、标识码】A【文章编号】1671-8801(2013)06-0009-02随着全反式维甲酸和碑剂的广泛使用，急性早幼粒细胞白血病(APL)的预后已经得到明显改善。但是对全反式维甲酸耐药以及碑剂长期使用后的毒副作用仍然不利于患者的长期生存，因此仍然需要安全、有效、经济的方法，治疗全反式维甲酸耐药APL患者。威灵仙是一味价廉物美的中药,主要用于治疗风湿性骨痛，腰背痛。研究发现其发挥作用的主要成分是皂昔，且已有报道其有明显的抗恶性肿瘤的效果[l]o本研究选择APL耐药细胞株MR2为研究对象，初步探讨威灵仙皂昔对APL耐药细胞的凋亡作用。1材料

3、与方法1.1细胞株：耐全反式维甲酸急性早幼粒细胞白血病细胞株（MR2细胞）引自四川大学华西医学院。1.2实验试剂：威灵仙皂昔（在泸州医学院药研所）自行提取[1];二甲基亚枫DMSO购于Sigma公司；WST1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购于江苏碧云天生物技术研究所；AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司；亚碑酸购于黑龙江哈尔滨医大药业有限公司（10mg/支）。1.3细胞培养：将MR2细胞接种于RPMI1640培养液中，置于5Oml/LCO2.饱和湿度、371恒温孵箱中悬浮培养，每2-3d换液传代。

4、1.4WST-1法检测威灵仙皂昔对MR2细胞的增殖抑制作用：选择对数期生长期MR2细胞,将细胞调整为浓度为1X104个/ml并接种于96孔酶标板，每孔加细胞悬液lOOul,共设8个实验组（每组5个平行孔，实验重复三次），以终浓度0.01%DMS0为空白对照组，终浓度1.Oumol/1亚碑酸为阳性对照组，终浓度200ug/ml>400ug/ml、600ug/ml、800ug/ml>lOOOug/ml.1200ug/ml威灵仙皂昔为实验组。分别培养24h、48h、72h后。每孔加入10ulWST-1溶液，继续在细胞培养箱孵育2h后。在45

5、0nni测定，按以下公式计算抑制率。细胞增殖抑制率（％）二（1-A实验组A对照组）X100%1.5流式细胞仪检测凋亡率：调整细胞浓度为1X106个/ml接种于六孔板，设五个实验组（每组设三个平行对照,实验重复三次），以终浓度0.01%DMS0为空白对照组，终浓度lumol/ml亚神酸为阳性对照组，终浓度800ug/ml.1000ug/mls1200ug/ml威灵仙皂昔为实验组。分别培养72h。用流式细胞仪检测细胞凋亡。1.6统计学分析：实验数据计算均值、标准差，各组应用方差分析，以a=0.05为检验水准，P