丙戊酸钠诱导骨髓增生异常综合征细胞株 mutz1凋亡的实验研究

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1、丙戊酸钠诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ1凋亡的实验研究：赵慧慧，陈宝安,高冲，邵泽叶，夏国华，丁家华，孙耘玉，【摘要】为了探讨丙戊酸钠(sodiumvalproate，VPA)对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ1的生长抑制及诱导凋亡作用，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VPA对细胞生长的抑制作用；采用光学显微镜和电子显微镜观察VPA作用后细胞形态的变化；应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度VPA作用后细胞凋亡的比例和细胞周期分布的变化。结果显示：VPA对MUTZ1细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性；经4mmol/LV

2、PA处理MUTZ1细胞72小时后,细胞呈现典型的凋亡形态特征，光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体；透射电子显微镜下可见凋亡细胞核染色质边集、胞浆浓缩、密度增加，胞浆内大小不规则的染色质团块；流式细胞术结果表明，细胞凋亡率随着VPA浓度的增加而逐步增高，G0/G1期细胞比例随着VPA浓度的增加而逐渐增多，S期细胞比例逐渐减低,细胞被阻滞在G0/G1期。结论：VPA通过G0/G1期阻滞诱导MUTZ1细胞凋亡，从而抑制MUTZ1细胞增殖。【关键词】骨髓增生异常综合征ApoptosisofHumanMyelodysp

3、lasticSyndromeCellLineMUTZ1InducedbySodiumValproateAbstractTostudytheeffectsofsodiumvalproate(VPA)onhumanmyelodysplasticsyndromecelllineMUTZ1.ThecellproliferationinedbyMTTassay,apoptoticmorphologicalfeaturesicroscopyandtransmissionelectronmicroscopy,cellapoptosisandcell

4、cycleshiftetry(FCM).Theresultsshoedependentmanners.ThetypicalapoptoticmorphologicalfeaturesappearedinMUTZ1cellstreatedmol/LVPAfor72hours.Pyknosisofcellsandnuclei,disintegrationofnuclearchromatinandapoptoticbodycouldbeobservedbylightmicroscopy.Aggregationandmarginationof

5、nuclearchromatin,concentrationofplasm,incrementofdensityandchromatinmassofirregularsizecouldbeobservedbytransmissionelectronmicroscope.ThefloetricanalysisindicatedthattheVPAcouldinducecellapoptosis,apoptosisrateincreasedindosedependentmanner,ratioofcellsatG0/G1phaseincre

6、asedandratioofcellsatSphasedecreasedindosedependentmanner,thecellsvalproate；MDS；MUTZ1cellline；apoptosisJExpHematol2007;15(4):743-747骨髓增生异常综合征(MDS)是一组以血细胞质、量异常和高风险发展为急性白血病为特征的恶性克隆性造血干细胞疾病。由于本病具有高度的异质性,目前临床尚无明确有效的治疗方法。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）可通过诱导细胞周期停滞、细胞凋亡抑制多种肿瘤细胞的生长增殖［1-3］，它

7、的应用标志着一种全新的肿瘤治疗途径。丙戊酸钠(sodiumvalproate,VPA)是一种传统的抗癫痫病药物，毒副作用轻微，长期使用耐受性好，其在抗癫痫病有效治疗浓度时表现出很强的HDACI活性［4］。本实验研究了VPA抑制MDS细胞株MUTZ1生长增殖以及诱导其凋亡的作用。制剂和试剂VPA由连云港恒瑞制药厂惠赠,纯度为99.2%,分子式为C8H15NaO2,以PBS配制成0.5mol/L浓度,过滤分装,贮存于-20℃,实验证明所用药物浓度的PBS含量对细胞生长无影响。RPMI1640培养液为Gibco公司产品，小牛血清购自杭州四季清

8、有限公司，四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲亚砜（DMSO）为Sigma公司产品，AnnexinVFITC凋亡和细胞周期分析试剂盒为BectonDickinson公司产品。细胞和细胞培养人MDS