中低温度热疗诱导骨肉瘤细胞株凋亡

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1、中低温度热疗诱导骨肉瘤细胞株凋亡　　【Abstract】AIM:Toobservetheapoptosisoftheosteosaracells(OS9901)inducedbyhyperthermiaandtoexplorethepossiblemechanismformildtemperaturetreatmentofosteosara.METHODS:TheosteosaraOS9901cellsperaturesfor1h.Thecellapoptosisicroscope,TUNELstainingandcounting.The

2、Bcl2proteinexpressionintheOS9901cellsia(43℃,1h)usingtheimmunohistochemicaltechnology.RESULTS:Agreatnumberofabnormalosteosaracellsentfor1h.Transmissionelectronmicroscopydemonstratedtypicalapoptosismorphologicalfeaturesofthecells,includingsizereduction,chromatincondensation

3、,andapoptoticbodiesappearance.Thehighestapoptosisratereached42%analyzedbyTUNELstaining.Theimmunohistochemistryshoententfor1hinducesapoptosisofosteosaracells.HyperthermiadecreasestheBcl2proteinexpressionintheosteosaracells,soastoinducetheapoptosisofthecells.Thisstudyprovide

4、ssometheoreticalbasisforthemechanismunderlyingtheapoptosisoftumorcellsinducesbythermotherapy.　　【Keyia,induced;osteosara;apoptosis;ultrastructure;immunohistochemistry　　【摘要】目的：研究加热诱导成骨肉瘤细胞株(OS9901)凋亡，为中低温度热疗辅助成骨肉瘤综合治疗提供理论依据.方法：成骨肉瘤OS9901细胞株分别经不同温度的热疗作用1h，用TUNEL法染色及计数、透射电子显微

5、镜观察其对骨肉瘤细胞株的诱导凋亡作用.同时通过免疫组织化学染色，观察43℃1h热疗对成骨肉瘤细胞株OS9901的Bcl2蛋白表达的影响.结果：43℃作用1h的成骨肉瘤细胞株继续培养6h后出现大量异常细胞，透射电镜观察可见有典型的细胞凋亡特征性形态改变.TUNEL法染色后通过计数可见有42％的细胞凋亡比例.免疫组织化学显示，43℃作用1h的成骨肉瘤细胞株6h后Bcl2蛋白的表达明显减少.结论：43℃作用1h可以诱导成骨肉瘤细胞株OS9901凋亡.加热后成骨肉瘤细胞Bcl2表达减少，从而进一步诱导发生细胞凋亡，为热疗诱导肿瘤细胞凋亡的机

6、制提供了部分理论依据.　　【关键词】高温，诱发；骨肉瘤；细胞凋亡；超微结构；免疫组织化学　　0引言　　　　骨肉瘤好发于青少年，早期易发生肺部转移，常危及患者生命.由于其发病机制以及病因学仍然未知，临床治疗上还有很多难点.1962年Crile的实验和临床研究奠定了高热治疗恶性肿瘤的生物学基础.特别是20世纪80年代以来，用高温的方法治疗骨肿瘤已取得初步疗效［1］，热疗也就被认为是继手术、化疗、放疗及免疫疗法之后的又一大疗法.我们就中低温诱导骨肉瘤细胞凋亡及相关作用机制进行研究，为热疗辅助骨肉瘤治疗的临床应用提供实验依据.　　1材料和方法　　1.

7、1材料第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究所自建的人成骨肉瘤细胞株OS9901［2］.RPMI1640,胰酶购自Gibco公司，新生小牛血清购自杭州四季青生物制品厂.恒温水浴加热器：Polystat86633型，水温±0.1℃.TUNEL试剂盒购自BoehringerMannheim公司.bcl2多克隆抗体购自美国SantaCruz生物技术公司.免疫组织化学试剂盒、DAB显色试剂盒均购自华美公司.电子显微镜为日本GEM2000EX公司产品.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养骨肉瘤OS9901细胞株常规以单层细胞贴壁培养于含100g/L小牛

8、血清的RPMI1640培养液中（含青霉素1×105U/L，链霉素100mg/L，以0.6mol/L碳酸氢钠溶液调PH值至7.0左右），置于37℃，CO2恒温孵育箱，