微波辅助酶法提取白花蛇舌草总黄酮的工艺研究

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1、微波辅助酶法提取白花蛇舌草总黄酮的工艺研究　　摘要：为优化微波辅助酶法提取白花蛇舌草（Hedyotisdiffusa）总黄酮工艺，在单因素试验基础上，应用中心组合设计，采用二次多项式逐步回归分析方法对提取工艺条件进行了优化，确定微波辅助酶法提取白花蛇舌草总黄酮工艺最佳条件为酶解时间1.5h、酶解温度45℃、酶用量1.4%、pH5.5，按此工艺条件进行验证，白花蛇舌草总黄酮提取率可达4.42%。　　关键词：白花蛇舌草（Hedyotisdiffusa）；总黄酮；微波辅助；酶法　　中图分类号：S567.21+9；R284.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2016）14-3708-04　

2、　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.14.042　　Abstract：Microwave-assistedenzymeticextractionoftotalflavonoidsinHedyotisdiffusaWilld.wasstudiedbyusingsinglefactorexperimentandcentralcompositedesigncombiningquadraticpolynomialstepwiseregressionanalysis.Itwasconcludedthattheoptimalconditionsofextract

3、ionwere：enzymolysistime1.5h，enzymolysistemperature45℃，enzymedosage1.4%andpH5.5.Undertheseconditions，theyieldoftotalflavonoidsinHedyotisdiffusaWilldwasupto4.42%.　　Keywords：Hedyotisdiffusa；totalflavonoids；8microwave-assisted；enzymeticmethod　　白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草（Hedyotisdiffusa）的干燥全草，广泛分布于中国东南和西南各省，具有清热解毒

4、、消痛散结、利湿除湿之功效，尤善治疗各种类型炎症，是民间常用中草药[1]。白花蛇舌草中含大量生物活性物质，如黄酮类、有机酸及其酯类、蒽醌类、萜类等成分[2]，其中黄酮类是其主要的药效成分，具有抗菌抗炎、增强免疫系统、抗肿瘤、抗化学诱变等作用[3，4]，并在临床上得到了广泛应用[5，6]。据文献报道，白花蛇舌草中黄酮类化合物的提取方法主要有微波辅助法[7，8]、超声提取法[9]及醇提热回流法[10]等，关于用微波辅助联合酶法提取白花蛇舌草总黄酮的方法尚未见报道。本研究在单因素试验基础上，使用响应面分析法优化白花蛇舌草总黄酮的提取工艺，为白花蛇舌草总黄酮的进一步开发研究奠定基础。　　1材料与方法　

5、　1.1材料、试剂与仪器　　白花蛇舌草药材购自赣州市丁氏草药店，经赣南医学院药学院中药鉴定教研室程齐来教授鉴定。　　芦丁标准品（含量≥98%，天津一方科技有限公司）；纤维素酶（3×104μ/g，江苏淮安百麦绿色生物能源有限公司）；无水乙醇、石油醚、盐酸、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯。8　　UV-6100PCS型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；SHA-C型水浴恒温振荡器（金坛市白塔新宝仪器厂）；HH-2型数显恒温水浴锅（金坛市城东新瑞仪器厂）；WF-4000型微波快速反应系统（上海屹尧分析仪器有限公司）；FW135型手提中药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；FA1104型分析天平（

6、上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；202A-2型电热干燥箱（上海阳光试验仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。　　1.2方法　　1.2.1标准曲线的绘制精密称取13.50mg芦丁标准品，用现配的60%乙醇溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀，得135.0mg/L的芦丁标准储备溶液。再精密量取芦丁标准储备液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10.0mL容量瓶中。依次分别加60%乙醇稀释至5.0mL，加入5%亚硝酸钠溶液0

7、.3mL，摇匀，静置5min，再加入0.3mL的10%硝酸铝溶液，迅速摇匀，静置6min，最后加入4mL4%氢氧化钠溶液，混匀，均用乙醇稀释至刻度，充分摇匀。放置15min后，以不加芦丁的试剂作空白对照，检测波长设定为509nm。得吸光度（Y）与浓度X（mg/L）的标准回归方程Y=0.0100X-0.0006，R2=0.9993。　　1.2.2白花蛇舌草总黄酮的提取　　1）白花蛇舌草脱脂粉的制备。