谷子类受体蛋白激酶基因sirlk35的克隆及原核表达

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1、谷子类受体蛋白激酶基因SiRLK35的克隆及原核表达　　摘要：本研究以“豫谷1号”cDNA为模板，通过PCR技术获得类受体蛋白激酶基因SiRLK35（NCBI登录号：XM_004956247.2）的全长序列。生物信息学分析显示，该基因编码蛋白由392个氨基酸残基构成，包含一个S_TKc保守结构域以及一个TFS2N结构域，含3个跨膜结构域，N端有信号肽。SiRLK35基因经BamHⅠ、SalⅠ双酶切后，利用pET-28a构建原核表达载体，转化大肠杆菌菌株BL21（DE3），经0.5mmol/LIPTG于25℃诱导

2、12h后，在44.6kD处得到一明显诱导表达蛋白条带，表达产物与预期相符，证明SiRLK35基因可在大肠杆菌中诱导表达。该结果为进一步研究SiRLK35基因功能奠定基础。　　关键词：谷子；类受体蛋白激酶；SiRLK35；原核表达　　中图分类号：S515+Q78文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）09-0001-05　　CloningofReceptor-LikeProteinKinaseGeneSiRLK35　　fromFoxtailMilletandItsProkaryoticExpress

3、ion　　WangYifan1，2，LiZhen1，PanJiaowen1，WangQingguo1，LiuWei1*　　（1.BiotechnologyResearchCenter，ShandongAcademyofAgriculturalSciences/ShandongProvincialKeyLaboratoryof　　CropGeneticImprovement，EcologyandPhysiology，Jinan250100，China；10　　2.CollegeofLifeSciences，Qin

4、gdaoAgriculturalUniversity，Qingdao266109，China）　　AbstractInthisresearch，thefull-lengthsequenceofreceptor-likeproteinkinasegeneSiRLK35（NCBIaccessionnumber：XM_004956247.2）wasamplifiedbyPCRtechniquewiththecDNAofYugu1astemplate.Bioinformaticsanalysisshowedthatth

5、eproteinproductofSiRLK35wascomposedof392aminoacids.ItcontainedoneS_TKcconserveddomain，oneTFS2Ndomain，threetransmembranedomainsandaNterminalsignalpeptide.ThesequenceofSiRLK35wasdigestedwithBamHⅠandSalⅠ，andthentherecombinedprokaryoticexpressionvectorpET-28a-Si

6、RLK35wasconstructedsuccessfullythroughconnectingthefragmentwithpET-28a.TherecombinantwasfurthertransformedintoE.colistrainBL21（DE3）.Inducedwith0.5mmol/LIPTG，a44.6kDfusionproteinwasobtained，whichprovedthattheSiRLK35couldbeinducedtoexpressinE.coli.Thisresearch

7、layedagoodfoundationforfurtherstudyofthefunctionofSiRLK35gene.　　KeywordsFoxtailmillet；Receptor-likeproteinkinase；SiRLK35；Prokaryoticexpression　　谷子[Setariaitalica（L.）10Beauv.]又称为粟，是起源于我国的古老作物，具有抗旱耐贫瘠的特点，是旱作生态农业的重要组成部分。近年来，其营养保健价值、国际竞争力和产量潜力受到研究者的普遍关注[1]。对谷子进行

8、有目的、有针对性的品质、性状研究及抗逆机制的解析是现代谷子基因组学研究发展的重要方向。　　前期研究中，通过同位素标记相对与绝对定量（isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ）技术，以自然干旱处理的“豫谷1号”幼苗为材料，筛选到一个响应干旱、蛋白表达量明显下调的类受体蛋白激酶（编号K3ZRC5），对其编码基因序列分析显示，其