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1、注射雪胆乙素在大鼠体内药动学探究［摘要］建立血浆样品中雪胆乙素的测定方法，研究雪胆乙素在大鼠体内的药动学特征。大鼠经尾静脉注射给药，以苯海拉明为内标(internalstandard,IS),采用液相色谱-串联四级杆质谱(liquidchromatographytandemmassspectrometry,LC-MS/MS)法测定不同时间点大鼠血浆中雪胆乙素浓度。质谱采用电喷雾(ESI)离子源，多反应监测模式正离子检测，确定目标化合物及内标的离子对分别为m/z503.2/113.1和m/z256.0/167.2o色谱柱为Ag订entZOB
2、AXSB-C18(2.1mmX50mm,1.8um),甲醇-0.1%甲酸55:45等度洗脱，流速为0.2mL-min-lo采用DAS2.0软件对所得的血药浓度进行拟合，求算相应的药动学参数。大鼠经尾静脉注射雪胆乙素3.0mg-kg-l,目标物血浆质量浓度在10.5〜3150Ug•L-1内线性关系良好(R2二0.996),标准曲线定量下限为10.5ug•L-1,信噪比S/N=12；日内精密度RSD精密称取内标盐酸苯海拉明对照品1.14mg,置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，配成苯海拉明质量浓度为100mg•L-1的内标储备液。精密
3、量取内标储备液，用甲醇稀释成质量浓度为50Ug•L-1的内标溶液，置于-4冰箱中备用。2.4标准溶液血浆样品的配制精密量取雪胆乙素对照品储备液，甲醇逐级稀释得0.105,0.315,1.05,3.15,10.5,31.5mg-L-1系列对照品标准溶液。取上述对照品溶液各20uL,加入180uL空白血浆，配成雪胆乙素血浆质量浓度分别为10.5,31.5,105,315,1050,3150ug•LT的标准血浆样品。2.5质控血浆样品的配制按2.4项方法制备雪胆乙素低、中、高3个质量浓度质控血浆样品(分别为31.5,315,2835ug•L-1
4、)o2.6血浆样品的处理取血浆样品50uL,依次加入甲醇100UL,内标溶液50UL,涡流混合1min,沉淀蛋白,于1万r•min-1离心5min,取上清5uL进行LC-MS/MS分析。2.7药代动力学实验健康雄性Wistar大鼠6只，给药前12h禁食，自由饮水。尾静脉注射雪胆乙素3.0mg•kg-1［用生理盐水和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)将雪胆乙素溶解配成质量浓度为0.3g-L-1的澄清尾静脉注射液，吐温80质量分数实验采用电喷雾(ESI)离子源，选择多反应监测(MRM)模式以正离子进行质谱扫描,同时选择和检测2组特定且直接
5、相关的离子对，实现对前体离子和产物离子同时监测。在本实验色谱条件下，既能与生物样品中的内源性基质实现分离，又使得待测物在较短的时间内出峰。在色谱分离过程中还发现，若在流动相中加入适量的甲酸灵敏度显著提高，于是选择在流动相中加入0.1%的甲酸以提高灵敏度。本文采用LC-MS/MS建立了定量分析血浆中雪胆乙素的方法，首次考察了雪胆乙素在大鼠体内的药动学研究。尾静脉注射雪胆乙素的药动学参数AUCO-t为(811.615±111.578)ug•h•L-l,tl/2为(1.285±1.390)h,CL为(3.627±0.487)L•h•kg-1,V
6、d为(6.721±7.429)L-kg-lo该法操作简便、快捷，具有分析时间短(5.1min)、灵敏度高(10.5Pg•L-1)的优点，已成功应用于雪胆乙素注射液在大鼠体内药动学研究，为其在临床研究和新药设计提供理论基础和依据。[参考文献][1]董建勇，岳磊，邵薇薇，等.中华雪胆化学成分研究(III)[J].中国中药杂志，2012,37(6)：814.[2]聂瑞麟.葫芦科植物三菇皂就研究十年进展(1980-1992)[J].云南植物研究，1994,16(2)：201.[3]白敏，李宏亮，徐贵丽.雪胆属植物化学成分及药理活性研究进展[J].
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