甲基-β-环糊精对肺泡ⅱ型上皮细胞增殖和tgf-βsmad信号通路的影响

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1、甲基-β-环糊精对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响王勤，王建春，李玉英，王关嵩（400037重庆，第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,全军呼吸病研究重点实验室）［摘要］目的观察甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin，MβCD)破坏小窝（caveolae）对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响。方法分离培养大鼠AECⅡ，免疫荧光双标检测小窝蛋白-1（caveolin-1）和TGF-β受体Ⅰ(TβR-Ⅰ)表达和分布关系。以M

2、βCD（5mmol/L）破坏AECⅡ细胞膜Caveolae，设空白对照组，非离子去污剂法提取脂筏检测TβR-I与Caveolin-1在细胞膜上的分布；Westernblot检测Caveolin-1和磷酸化Smad2（pSmad2）表达；四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力。结果荧光双标和脂筏提取结果提示TβR-I主要分布于Caveolae区域，MβCD破坏Caveolae后，TβR-Ⅰ重新分布于细胞膜上非脂筏区域；MβCD干扰组Caveolin-1蛋白表达（24.53±3.24）%较正常对照组（

3、54.83±5.67）%显著下调(P<0.01)，而TGF-β/Smad信号通路下游分子pSmad2蛋白表达（10.93±1.11）%较对照组（8.36±0.64）%上调（P<0.05）；MβCD干扰组细胞增殖率（31.00±4.18）%较对照组（49.20±4.44）%显著降低（P<0.01）。结论MβCD破坏Caveolae结构可抑制AECⅡ增殖，其机制可能与TβR-Ⅰ在非脂筏区域的聚集和Caveolin-1下调导致的TGF-β/Smad信号通路增强有关。［关键词］肺泡Ⅱ型上皮细胞；小窝；小窝蛋白

4、-1；转化生长因子β[中图法分类号][文献标志码]AInfluencesofmethyl-β-cyclodextrin-causedcaveolaedestructiononTGF-β/SmadsignalingpathwayandonproliferationoftypeIIalveolarepithelialcellsWangQin,WangJianchun,LiYuying,WangGuansong(InstituteofRespiratoryDiseasesofPLA,XinqiaoHospi

5、tal,theThirdMilitaryMedicalUniversity,ChongQing,400037,China)[Abstract]ObjectiveTostudytheinfluencesofmethyl-β-cyclodextrin(MβCD)-causedcaveolaedestructiononproliferationoftypeIIalveolarepithelialcells(AECsII)andonTGF-β/SmadsignalingpathwayinAECsII.Meth

6、odsRatAECsIIwereisolatedthroughenzymedigestion,andthenidentifiedthroughimmunofluorescenceassay.Thedistributionofcaveolin-1(acaveolae-specificprotein)andtypeITGF-βreceptor(TβR-I)inAECsIIcellmembraneswasanalyzedwithdouble-labelingimmunofluorescenceassayan

7、dconfocallaserscanningmicroscopy.AECsIIweredividedintoatreatmentgroupandacontrolgroup.MβCD(5mmol/LinDMEM)wasaddedintothetreatmentgrouptodestroycaveolaeofAECsII,whileDMEMwasaddedintothecontrolgroup.LipidraftswereextractedfromAECsIIbynonionicdetergentmeth

8、od,andthedistributionofcaveolin-1andTβR-IincellmembranesoftreatedAECsIIwasanalyzedthroughSDS-PAGE.Theexpressionofcaveolin-1andphosphorylatedSmad2(pSmad2,adownstreammoleculeofTGF-β/Smadsignalingpathway)inAECsIIwasanalyzedthroughWe