ace2对脂多糖损伤人脐静脉内皮细胞的抗黏附作用

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1、关于本论文学术方面的意见：1、为何设置氯沙坦钾组、A779组的意义未能阐明清楚。2、补充内皮细胞损伤模型建立依据。说明进行LPS处理时，浓度选择1000ng/mL、时间点选择6h的依据。3、补充ACE2蛋白表达的相关结果。4、ACE2具有一定抗黏附作用的证据不够充分，只能说二者之间有关联，谁是因谁是果的证据还不够明确。以上意见修改之后，请在此方框里对修改情况和争议处一一作出说明！１、答：因为原计划阻断ACE2以观察ICAM-1的含量变化，以便从反面论证，并弄清ACE2是否存在于ICAM-1的上游，是否是引起ICAM-1含量变化的原因。

2、但是因为ACE2的特异性阻断剂Ｍ２Ｎ－４７６０市场上买不到，所以分别设置氯沙坦钾组以阻断ACE2的代谢产物AngⅡ，设置A779组以阻断ACE2的代谢产物Ang1-7，并分别观察AngⅡ及Ang1-7被阻断后，ICAM-1的含量变化，以便从反面观察ACE2的主要代谢产物AngⅡ及Ang1-7与ICAM-1的关系，从而得到ACE2对ICAM-1的间接作用。2、答：讨论部分第一段最后三句话已对LPS处理时选择1000ng/ml及6h作为造模条件做了阐述。首先THP-1黏附实验结果显示细胞黏附数呈LPS处理浓度依赖性增加，在1000ng/m

3、l时大最大效应。其次即文献[9]《Lackofproinflammatoryeffectsoffreefattyacidsonhumanumbilicalcordveinendothelialcellsandleukocytes》中“HUVECexperimentaldesign”中第一段第5句话“Thetimepointswerechosenafterperformingpilotexperimentsshowingmaximumadhesionmoleculeexpressionafter6-8hrLPSincubation,fo

4、llowedbyadeclinetowards24h.”表明在HUVEC与THP-1黏附过程中起决定因素的黏附分子，在静息状态中呈低水平表达，经LPS处理后其表达急剧增加，在6-8h时达最大值，并持续至24h后下降。而本文实验结果也显示在LPS处理6h时，单核细胞黏附数已较空白对照组显著增加。由以上两点决定选择1000ng/mlLPS处理6h作为内皮细胞损失模型建立的条件。3、答：修改后的文章，已在“材料与方法”中“1.5WesternBlot检测ACE2的蛋白表达水平”及“结果”中“2.3血管内皮细胞中ACE2的蛋白表达”处补充了A

5、CE2蛋白表达相关方法及结果。4、答：首先本实验结果显示：ACE2蛋白及基因表达水平显著降低的模型组较空白对照组的ICAM-1蛋白含量显著降低，表明ICAM-1含量的增加与ACE2表达上调相关联。其次ACE2的主要生理功能是将AngⅡ讲解为Ang1-7，即减少AngⅡ的含量，增加Ang1-7的含量。再次，本实验结果显示：AngⅡ含量显著升高的模型组较空白对照组的ICAM-1含量显著升高。且用氯沙坦钾预处理，特异性阻断AngⅡ与AT1受体结合，阻止其下游信号通路激活后，ICAM-1的含量较模型组显著降低。经以上正反两面论证后，表明ICA

6、M-1在AngⅡ的下游，且，AngII升高可引起ICAM-1升高。该结论与参考文献[18]《AngiotensinⅡstimulatesintercellularadhesionmolecule-1viaanAT1receptor/nuclearfactor-kappaBpathwayinbrainmicrovascularendothelialcells》中AngⅡ通过激活NF-κB信号通路，上调ICAM-1在人脑微血管内皮细胞中的表达的结论相一致。最后，本实验结果显示：Ang1-7含量显著降低的模型组较空白对照组的ICAM-1含量

7、显著升高。且用A779预处理，特异性阻断Ang1-7与Mas受体结合，阻止其下游信号通路激活后，ICAM-1的含量较空白对照组显著升高。经以上正反两面论证后，表明ICAM-1在Ang1-7的下游，且，Ang1-7升高可引起ICAM-1降低。该结论与参考文献[19]《》中Ang1-7含量升高的慢病毒转染ACE2过表达间充质细胞中ICAM-1含量显著降低的结论相一致。由以上四点充分得出以下结论：ACE2上调后，通过降解引起ICAM-1含量增加的AngⅡ和生成引起ICAM-1含量减少的Ang1-7，间接地减少ICAM-1含量。其他格式、撰写

8、方面的意见仔细阅读以下批注后一一修改！存在争议且不做修改的地方，保留批注并在批注中解释：ACE2对脂多糖损伤人脐静脉内皮细胞的抗黏附作用何芸，袁颖琳，张琴，杨发健，杨俊霞（400016重庆，重庆医科大学药理教研室，重庆市