脂联素对人脐静脉内皮细胞cd55和cd59表达的

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1、脂联素对人脐静脉内皮细胞CD55和CD59表达的【摘要】目的观察脂联素对人脐静脉内皮细胞补体调节蛋白CD55和CD59表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞；分为空白对照组、C反应蛋白（CRP）组和脂联素组，人脐静脉内皮细胞分别与50μg/ml的CRP和25μg/ml的脂联素共同孵育48h，流式细胞仪检测CD55和CD59的表达。结果CRP刺激后CD55平均荧光强度、CD59平均荧光强度和CD55阳性百分率较空白对照组升高（3.84±0.21比2.81±0.06，P＜0.001；69.72±4.48比51.15±7.86，P＜0.01；98.30±1.13比93.5

2、7±1.18，P＜0.001)；脂联素刺激后CD59平均荧光强度和CD55阳性百分率较空白对照组升高（63.02±4.90比51.15±7.86，P＜0.05；96.55±0.66比93.57±1.18，P＜0.01）。结论脂联素是人脐静脉内皮细胞CD55和CD59表达的上调因素，并可能通过上调内皮细胞CD55和CD59的表达发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用。【关键词】脂联素；补体调节蛋白；动脉粥样硬化脂联素是脂肪细胞分泌的特异性脂肪细胞因子，有调解糖脂代谢及抗动脉粥样硬化特性。C反应蛋白(CRP)可激活补体经典路径并有促动脉粥样硬化作用。近几年的研究发现高脂血症患者外周

3、血淋巴细胞CD55、CD59表达下调〔1〕；CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度与腰围、腰臀比和CRP负相关〔2〕，与脂联素正相关〔3〕，这提示脂肪细胞因子和炎症状态很可能影响补体调节蛋白表达。本研究通过体外实验揭示CRP和脂联素对人脐静脉内皮细胞株（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs）补体调节蛋白表达的影响，探讨补体调节蛋白表达的调节机制及脂联素抗动脉粥样硬化的新机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　HUVECs购自中南大学湘雅细胞库；重组人脂联素球形结构域购自Biovendor公司；CRP购自Chemicon公司；胎牛血

4、清购自杭州四季青公司；RPMI1640购自Gibco公司；胰酶购自Sigma公司；流式细胞仪为美国Coulter.EPICS.XL；PE标记的CD55单抗购自Ebioscience公司，批号为E025933；PE标记的CD59单抗购自Caltag公司,批号为1380842C。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　HUVECs培养于含10%胎牛血清和1%双抗的RPMI1640培养液，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。每天换液一次，每2～3天用0.25%的胰酶消化传代。生长至85%融合时用0.25%胰酶消化、细胞计数板计数后均匀接种于24孔细胞培养板备用，接种细胞密度为

5、5×104个/ml。　　1.2.2CRP对HUVECsCD55和CD59表达的影响　　①实验分组：待细胞贴壁后改用含8%胎牛血清的RPMI1640培养液培养24h后弃去培养液；按照随机化原则CRP组重复5孔，空白对照组重复5孔；根据预实验结果CRP组每孔加入浓度为50μg/ml的CRP，用含5%胎牛血清的RPMI1640调至相同体积；两组细胞在37℃、5%CO2培养箱中培养48h后进行流式细胞仪检测。②HUVECsCD55和CD59表达的检测：0.25%胰酶消化后吹打成均匀单细胞悬液，1500r/min离心5min，弃去上清；加入PBS液2ml，1500r/min离心5

6、min，弃上清，如此洗涤2次；留取细胞沉淀加入1mlPBS液吹打成均匀单细胞悬液；阴性对照管分别加入鼠抗人IgG1和鼠抗人IgG2a10μl及细胞悬液100μl,标号的样品管分别加入PE标记的CD55单抗和CD59单抗各10μl及细胞悬液100μl；室温避光孵育15min后用2mlPBS重悬细胞；流式细胞仪分析5000个细胞，SYSTEMⅡTM软件分析。　　1.2.3脂联素对HUVECsCD55和CD59表达的影响　　①实验分组：待细胞贴壁后改用含8%胎牛血清的RPMI1640培养液培养24h后弃去培养液；按照随机化原则脂联素组重复5孔，空白对照组重复5孔；根据预实验结

7、果脂联素组每孔加入浓度为25μg/ml的脂联素，用含5%胎牛血清的RPMI1640调至相同体积；两组细胞在37℃、5%CO2培养箱中培养48h后进行流式细胞仪检测。②HUVECsCD55和CD59表达的检测同上。　　1.3统计学处理　　采用SPSS13.0软件，数据以x±s表示，组间比较用单因素方差分析。　　2结果　　2.1CRP对HUVECsCD55和CD59表达的影响　　50μg/ml的CRP孵育48h后，HUVECsCD55百分率和空白对照组比较显著升高(P＜0.01)；CD59百分率和空白对照组比较统计学差异无显著性；CD55平均