瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸损伤人脐静脉内皮细胞血管细胞间黏附分子－1表达的影响.pdf

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1、·1646·广东医学2015年6月第36卷第11期GuangdongMedicalJournalJun．2015，Vo1．36，No．11瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸损伤人脐静脉内皮细胞血管细胞间黏附分子一1表达的影响都宝顺，刘雪莲，刘勇，刘定辉，钱孝贤中山大学附属第三医院心内科，放射科(广州510630)【摘要】目的探讨瑞舒伐他汀(Rosu)对同型半胱氨酸(Hey)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管细胞间黏附分子一1(VCAM一1)表达的影响。方法原代培养HUVECs，2～3代进行试验，Mrr实验设立空白对照组、Hcy(

2、0．2～1．2mmo／／L)组、Rosu(0．5、1．0、2．0和5．0mmoL／L)纽，实验组：Rosu1．0mmo]／L和2．0mmo]／L进行预处理细胞，2h后加入0．6mmo1／L浓度的Hcy损伤HUVECs，ReattimePCR法测定VCAM一1mRNA表达，Westernblot法测定细胞VCAM一1蛋白含量；Rosu2．0mmol／L+甲羟戊酸(Mev)100~mol／L预处理2h后再加入0．6mmol／L浓度的Hcy以了解Mev对VCAM—l蛋白袁达的影响。结果Hcy组VCAM一1蛋白和mRNA表达较空白对

3、照组明显增强(尸<0．05)；Rosu组VCAM一1蛋白和mRNA表达较Hcy组明显减弱(P<0．05)，且Mev不能阻断Rosu的这种作用。结论Rosu可通过抑制HUVECs表达VCAM一1产生抗炎作用，且这种作用独立于其调脂作用。【关键词】瑞舒伐他汀；内皮细胞；同型半胱氨酸；炎症；动脉粥样硬化动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是动脉血管壁GAPDH多抗购于美国ProteinTechGroup公司，辣根酶的慢性炎症性疾病，最早的病理变化为内皮细胞的损标记羊抗兔IgG购于武汉博士德公司，辣根酶标记羊伤和功能

4、紊乱⋯。血浆高同型半胱氨酸(homocys—抗小鼠IgG购于北京博奥森生物技术有限公司；TRizolteine，Hcy)是冠状动脉、大脑动脉As相关的独立危险试剂购于美国Invitrogen公司，逆转录试剂盒和荧光定因素。最新的研究表明Hcy可通过特异性抑制谷量试剂盒购于大连宝生物工程有限公司，引物由广州胱甘肽过氧化物酶、促进炎症、氧化应激损伤等途径引瑞真生物技术有限公司设计合成。起内皮细胞功能紊乱。动脉内皮细胞与血液中的炎症1．2主要试剂配制方法细胞如单核细胞的黏附是AS的早期细胞行为之一。1．2．1Hcy母液精确称取Hc

5、y0．0338g(分子量血管细胞间黏附分子一1(vascularcelladhesionmole．135．2)，加入5mLPBS，配置成50mmol／L，经0．22mcule一1，VCAM一1)在介导单核细胞向内皮细胞黏滤器过滤备用。附、迁移过程中发挥着重要的作用。他汀类药物临1．2．2Rosu母液配制精确称取Rosu原粉0．0g床上已证实可显著降低AS相关疾病患者的病死率，其(分子量1155．36)，加入DMSO1mL溶解配制成10效应除与其调脂作用有关，还与调脂以外的作用，如抗mmmol／L储存液，经0．22m耐DMSO

6、的滤膜过滤除炎、抗氧化、改善血管内皮功能、稳定斑块、促进纤溶、菌后一20℃分装保存。抗血栓形成等作用有关。瑞舒伐他汀(rosuvastatin，t．2．3甲羟戊酸(Mev)母液配制精确称取MevRosu)是目前上市他汀中作用最强的他汀，有关其对人18．5mg用10mL的0．1mol／LNaOH溶解，用浓盐酸脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelial滴定pH至7．4，MiliQ水定容至14．2mL，即为MEV母cells，HUVECs)表达黏附分子的研究较少。2012年9液浓度为10mmol／L

7、，过滤除菌并分装，一20℃保存。月至2014年1月本研究采用体外原代培养HUVECs，工作浓度为100ixmol／L。通过Hcy损伤HUVECs建立细胞损伤模型，探讨Rosu1．3HUVEC原代培养与鉴定根据BANDIN等报对Hey损伤HUVECs后VCAM一1表达的影响。道的原代培养HUVECs的方法。人选对象为2012年9月至2013年6月在中山大学附属第三医院产科的健1材料与方法康剖腹产产妇，之前排除乙型肝炎、丙型肝炎、高血糖1．1材料Rosu购于英国阿斯利康制药有限公司(糖尿病或者妊娠期糖尿病)、高血压、高脂血症以及

8、(CASNO．147098—20—2)；Hcy购于Sigma—F1uka公获得性免疫缺陷综合征感染者。本研究经中山大学附司；鼠抗VCAM一1购于美国SantaCruz公司；胎牛血属第三医院医学伦理委员会批准。严格无菌条件下取清、I型胶原酶、0．05％～0．02％EDTA胰酶均购白美新生儿脐