大鼠胰腺不同发育阶段nbc1的表达研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文

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1、南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文太鼠遮鏖发直丕回险嬖丛垦￡!数塞达珏窒是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：生堑丝堂量金壬生堑堂作者签名：麴垒日期：型星：i』I论文使用授权声明本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文

2、。保密的论文在解密后遵守此规定。、作者签名：生鸱导师签名：a●勿∥1、～南京医科火学硕士学位论文大鼠胰腺发育中NBCl的表达硕士研究生曹丽华导师德伟教授南京医科大学生物化学与分子生物学系，南京，210029中文摘要运用高密度寡核苷酸芯片建立大鼠胰腺发育不同阶段(胚胎(E)12．5，E15．5，E18。5，新生和成年)的基因表达谱，经过生物信息学数据分析发现许多与胰腺功能相关的基因在E18．5相对高表达，提示胚胎发育后期胰腺功能正趋于完善和成熟，这个时期是形成典型胰腺结构的关键阶段，而胰腺结构是胰腺发挥正常生物学功能的基础。本研究从基因表达谱中

3、筛选出NBCl(electrogenicNa+-HC03一cotransporter)在E18．5相对性高表达，旨在初步探讨NBCl在胰腺发育不同阶段的表达及组织细胞学定位。运用RT-PCR技术进一步检测NBCl在大鼠胰腺发育不同阶段的mRNA表达水平，结果显示NBCl基因表达趋势与基因芯片检测结果相同；分别用蛋白免疫印迹及免疫荧光技术检测NBCl蛋白在大鼠胰腺发育不同阶段(胚胎(E)E15．5、El8．5、新生后(P)0、P7、P14、P21和成年(Adult))的表达及细胞组织学定位，结果显示NBCl在大鼠胰腺发育E15．5开始出现表达，

4、E18。5特异表达出现最高峰，新生下降直到P7第一个表达最低点，生后P14又上升形成第二个高峰，之后下降直到成年形成第二个表达最低点。NBCl在胰腺的组织细胞学定位随着胰腺发育阶段的变化而变化：胚胎期弥散分布在胰腺南京医科大学硕士学位论文内、外分泌细胞；新生之后随着胰腺结构的清晰可辨可发现NBCl表达在外分泌腺泡基底侧膜和顶侧膜及胰岛辽、p细胞膜，与腺泡细胞相比在成年期NBCl曼集中于§细胞。以上实验结果表明NBCl在胚胎发育中后期和胰岛重塑高峰期相对高表达。提示NBCl在胰腺发育过程中可能与胰腺结构形成及其功能发挥相关。关键词：NBCl胰腺

5、发育结构重塑酸碱平衡高密度寡核苷酸芯片免疫印记免疫荧光双标2南京医科大学硕士学位论文TheexpressionofNBC1inthedevelopmentofratpancreasM．D。candidateCaoLihuaSupervisorDeWeiDepartmentofbiochemistry，Nanjingmedicaluniversity,Nanjing，210029ABSTRACTWeexpectedtousehigh-densitymicroarray(Affymetrix)toanalyzetheexpressionprofi

6、lesofpancreasdevelopment。Wegeneratedtranscriptionalprofilesofpancreatictissueisolatedfromfivebiologicallysignificantstagesofdevelopment：embryonicday(E)12．5，E15．5，El8．5，newbornandadultpancreas．Theseanalysesimplicatem戤manygenesrelatedtopancreaticfunctionareenrichedinthelaterg

7、estationwhenisletarchitectureandfunctionaregraduallyforming．ThedifferentialexpressionofNBC1mRNAwasverifiedbyRT—PCR．Moreover，thedifferentialexpressionofNBC1proteinwasidentifiedbywesternblotting．NBC1localizedbothinisletsandexocrinepancreas，whichwasdetectedbydouble—labelingimm

8、unofluorescence．CombinedwithRT-PCRandWesternblotanalysis，wefoundthatthefirstpeakof