wfs1在大鼠胰腺发育不同时期的表达

《wfs1在大鼠胰腺发育不同时期的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南京医科大学硕士学位论文第一章引言胰腺主要行使两种生物学功能：产生消化酶；分泌四种内分泌激素(胰岛素．insulin、胰高糖素．glucagon、生长激素抑制素．somatostatin、胰多肽一pancreaticpolypeptide)以调节血糖的动态平衡。而这些功能的发挥依赖于完整的胰腺结构：腺泡和导管组成的胰腺外分泌部是消化酶产生的结构基础；四种内分泌细胞(仅、p、6、PP细胞)组成的内分泌胰腺即胰岛是血糖调节的结构基础(n。正是由于胰腺的重要生物学功能，胰腺发育一直都是发育生物学家关注和研究的焦点之一。胰岛素分泌相对或绝对不足引

2、起糖尿病，有些糖尿病患者的胰岛结构严重破坏，糖尿病发病率的不断上升使得对胰腺发育尤其是胰岛形成过程的研究显得更为重要伫-4)．胰腺起源于胚胎内胚层上皮细胞，大鼠胰腺在胚胎8．5天(E8．5)左右开始发育，E10．5背侧胰芽和腹侧胰芽开始融合，导管上皮细胞开始分化为p细胞；E12．5天大鼠胚胎胰腺中仅存在胰腺导管上皮细胞和间充质细胞，前者是胰腺发育的根源，而后者为胰腺的发育提供了空间环境；E14胰腺导管上皮分化为腺泡，内分泌细胞仅、13、6细胞分化成熟，能够分泌胰岛素和胰高血糖素等；E15．5左右分化成熟的内分泌细胞开始突破基底膜向周围问充

3、质迁移，内分泌细胞相互聚集，伐、6、PP．缸／胞围绕p细胞形成胰岛结构；E18．5周围腺泡结构逐渐清晰，典型胰岛结构基本形成并不断完善成熟直至出生后(5期。出生后两周内，内分泌细胞大量凋亡，随后的一周内内分泌细胞大量增生。到出生z．21；K．(P21)哺乳期结束，胰岛完成结构重塑和功能成熟(10-11)。南京医科大学硕士学位论文WFSl基因的表达产物是一种内质网上的跨膜蛋白，cDNA全长2742bp，分子量100KDa。Wolfram综合征是一种以少年时发生糖尿病，并且伴发神经系统病变，如视神经萎缩，神经性耳聋等为特征的一种常染色体隐性遗

4、传疾病(12-13)。wFSl编码wolframin蛋白，基因的突变导致Wolfram综合征的发生(14-15)。Wolframin功能尚不完全明确，可能属于一种新家族。研究表n凋WFSl蛋白调节内质网钙离子平衡，维持内质网应激能力，维持细胞分裂周期等(16-18)。在胰腺中有研究表明它在对成年小鼠维持D细胞数量以及对胰岛素分泌起到重要作用(19)。当内质网实际加工未折叠蛋白的能力与需求的不平衡时就产生了内质网应激。应激产生后会出现一种适应性反应，未折叠蛋白反应(UPR)，是由多种因子组成的信号通路。研究表明WFSl是UPR信号通路的组成

5、之一，是XBP一1的下游基因(m。到目前为止，围绕WFSl的研究主要集中在成年胰岛素分泌及其可能机制，胚胎发育未有涉及。本研究首次在大鼠胰腺不同发育阶段检测WFSl的表达，为研究WFSl在胰腺发育中的作用提供线索。本研究应用基因芯片技术检测到在大鼠胰腺发育过程中，WFSlmRNA的表达高峰出现在胰岛形成的关键阶段，即胚胎15．5天至胚胎18．5天，RT-PCR的结果验证了这样的表达趋势。另外，本实验运用免疫印迹技术确立WFSl在大鼠胰腺不同发育阶段的蛋白差异表达，AkEl5．5：虱]E18．5、AKP0：至)J成年表达量逐步递增；运用免疫

6、组织化学技术确定了WFSl在不同发育时期胰腺的组织定位，WFSl蛋白在不同发育时期的内分泌胰腺p细胞都有表达，而且首次发现WFSl在南京医科大学硕士学位论文间充质细胞出现表达。6南京医科大学硕士学位论文材料与试剂(一)试剂：第二章材料与方法TRIzOlReagentInvitrogenLifeTechnologiesRNeasyMiIliK“QIAGENSuperScriptIIInvitrogenLifeTechnologiesT7_Oligo(dT)24PrimerOperonEcoliDNALigaseNEBEcoliDNAPoly

7、meraseINEBE．coliRnaseHInvitrogenLifeTechnologiesT4DNAPolymeraseNEB5XSecondstrandbufferInvitrogenLifeTechnologies10mMdNTPInvitrogenLifeTechnologiesPhaseLockGelEppendorfPhenol／chloroform／isoamylalcoholArnbionEnzoRNATranscriptLabelingKitAffymetrixRNeasyMiIliKit(usedinIVTclea

8、nup)QIAGENDEPC．T托atedwaterAmbionTrizmaBaseSigma-AldrichMagnesiumacetate(MgOAc)Sigma-AldrichPotas