大鼠胰腺发育不同阶段肝细胞生长论文

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1、大鼠胰腺发育不同阶段肝细胞生长论文程梅吴玉龙贺秀香徐仁华孙丽红【摘要】目的研究肝细胞生长因子受体编码基因cmet在大鼠胰腺发育不同阶段的表达。方法采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5d（E12.5）、孕15.5d和孕18.5d、新生、成年胰腺进行基因转录水平分析，并用RTPCR技术验证基因在大鼠胰腺不同发育时期的表达。结果cmet基因在E15.5、E18.5较成年特异性高表达。经RTPCR验证，cmet基因表达趋势与芯片结果相符；与芯片cmet探针所用引物不同RTPCR，结果却在各发

2、育阶段呈现与芯片不同的表达趋势。结论提示cmet可能在胰腺发育过程中起到调控作用，参与胚胎胰腺发育中晚期细胞功能完善的信号传导过程。并且cmet在胰腺发育中发挥作用有可能存在不同转录本。【关键词】肝细胞生长因子受体编码基因cmet胰腺生长发育高通量寡核苷酸芯片RTPCR【Abstract】ObjectiveToinvestigatethefunctionofcmetinthedifferentdevelopmentstagesofratpancreas.MethodsUsingGene

3、ChipExpressionSet230Atodetectthesignalvalueofdifferentdevelopmentstagesofratpancreas:E12.5，E15.5，E18.5，neet.Resultscmetexpresshighlyatratembryonicday15.5，18.5.ThecmetexpressiontrendencyofGeneChipsisconsistenterofRTPCRofhaveanotherresult.Conclusion

4、cmetprotooncogenemayplaysaroleinthefunctionmaturationstagesofratpancreaticdevelopment.Theremaybedifferenttranscriptionsofcmetintheprogressionofratpancreaticmaturation.【Keyet，pancreaticdevelopment，genechips，RTPCR胰腺发育是一个复杂的过程，胰岛结构的形成和生物学功能发挥是一个重要环节

5、。大鼠胚胎胰腺发育分为三个阶段：①12.5d胰腺由胰腺上皮和间充质细胞组成；②胚胎15.5d左右由胰腺上皮细胞分化而来的内分泌细胞开始突破基底膜向间充质迁移并逐渐相互聚集黏附；③胚胎18.5d左右基本形成了典型的胰岛结构［１］。完整的胰岛结构是胰腺发挥正常生物学功能的基础，了解完整胰岛结构的形成过程及功能完善调控机制对糖尿病发病机制及治疗的研究有着重要的基础理论和应用价值。目前，尽管对胰腺胚胎发育的研究在形态学上已明确，但分子网络调控机制上却尚不明晰［２］。功能学研究已经证实在胰腺的整个发育过程

6、中信号通路和转录因子起着非常重要的作用，如FGF,Hedgehog,Notch，TGFβ/activin等信号通路以及NF1(Tcf1),HNF1β(Tcf1β),HNF4(Tcf4),Pdx1,NeuroD1,Ngn3,Pax4,Pax6等转录因子［３，４］。胰岛结构形成是一个受细胞黏附及迁移等多因子调控的过程［5，6］。本文以SD大鼠为模型，选取E15.5d、E18.5d及新生这三个大鼠胰腺发育和细胞功能完善的关键时期，通过affymetrix高通量多聚寡核苷酸芯片及RTPCR技

7、术对cmet基因在胰腺发育不同阶段的表达做出初步分析。为揭示cmet基因在胰腺发育细胞功能完善过程中的作用提供了一定依据。1材料与方法1.1材料成年SD大鼠60只，雌20只，雄40只，体质量250g左右，由南京医科大学动物中心提供。GeneChipMurineGenomeRAE230A芯片(Affymetrix公司)。mastercyclerPCR仪(Eppendorf公司),TrizolReagent(美国Gibco公司),RNAeasyMiniKit(Qiagen),RTPCR试剂盒(

8、Tayobo)。1.2方法1.2.1组织取材：于6:00时，将雌雄以1∶2合笼，次日检测有阴栓者，定为受精0.5d(E0.5)，取E12.5，E15.5和E18.5胚胎胰腺以及新生鼠胰腺；取怀有胚胎E12.5、E15.5和E18.5的母鼠，引颈处死，分离出胚胎，显微解剖镜下用显微镊子取出胰腺后，迅速在液氮中冷冻。新生和成年鼠直接分离出胰腺［7］。1.2.2胰腺发育各阶段芯片制备：用TrizolmReagent提取大鼠E12.5、E15.5、E18.5、新生和成年胰腺总RNA，利用RNAeasyM