大鼠胰腺发育中肝细胞因子受体编码基因的论文

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1、大鼠胰腺发育中肝细胞因子受体编码基因的论文【摘要】目的研究肝细胞因子受体编码基因cmet在大鼠胰腺发育不同阶段的表达及其编码蛋白的细胞定位。方法采用RTPCR技术检测cmet基因在大鼠胰腺不同发育时期：孕15.5d（E15.5）和孕18.5d(E18.5)、生后14d(P14)、生后21d（P21)、新生及成年胰腺的表达；并用免疫组化技术检测该基因编码的蛋白cMET在胰腺发育不同阶段的细胞定位。结果cmet基因在E15.5、E18.5d较成年特异性高表达，免疫组化结果显示该基因编码的蛋白c

2、MET在新生后的胰腺大量定位于胰岛细胞。结论cmet可能在胰腺发育过程中起到调控作用，参与胰腺发育中新生后胰岛结构重塑过程。【关键词】cmet；胰腺生长发育；RTPCR；免疫组化【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionandlocationofcmetprotooncogeneinthedifferentdevelopmentstagesofratpancreas.MethodsUsingRTPCRtodetecttheexpression

3、ofcmetprotooncogeneindifferentdevelopmentstagesofratpancreas:embryonicday15.5，embryonicday18.5，postnatalday14，postnatalday21，nemunohistochetodetectthelocationoftheproteinofcmetprotooncogeneinthedifferentstagesofratpancreaticdevelopment.Resultscmetp

4、rotooncogeneexpresseshighlyatratpostnataldays,espaciallyatP14、P21ofratpancreaticdevelopmentstages.Conclusioncmetprotooncogenemayplayaroleinthedevelopmentofratpancreasespaciallyintheisletremodationofpostnatalratpancreaticdevelopment.【Keyetprotooncoge

5、ne，pancreaticdevelopment.freelet受到越来越广泛重视。其编码蛋白的不同亚型异常表达与多种肿瘤的发生、发展密切相关［1～3］。自Lobstein和Recamier提出肿瘤的胚胎性源性概念以来,胚胎细胞与恶性肿瘤细胞生物学的比较研究日益受到了人们关注［4］，肿瘤细胞的发生、发展和胚胎发育过程存在一定的相似性［5～7］。在人类该基因全长为6641bp,存在不同转录本，大鼠该基因全长4189bp,编码形成的cMET蛋白与人类的cMET蛋白具有高度的同源性。2004年Atsus

6、hi等用流式细胞仪在成年小鼠胰腺导管上皮细胞检测到cMET蛋白的表达［8］。而该蛋白在胰腺发育不同阶段的表达及定位，未见明确报道。本研究以SD大鼠为模型，选取孕15.5d（E15.5）、孕18.5d（E18.5）及新生、生后14d(P14)、生后21d(P21)及成年这几个大鼠胰腺发育和功能完善的关键时期，通过RTPCR技术对cmet原癌基因在胰腺发育不同阶段的表达做出初步分析，并用免疫组化技术对该基因所编码的蛋白在大鼠胰腺不同发育阶段的表达进行定位分析，为揭示cmet基因在胰腺发育细胞功能完

7、善过程中的作用提供了一定依据，为临床糖尿病的治疗新途径提供一定的理论数据。1材料与方法1.1材料成年SD大鼠60只，雌20只，雄40只，体质量250g左右，由滨州医学院动物中心提供。mastercyclerPCR仪（Eppendorf公司）,TrizolReagent(美国Gibco公司),RNAeasyMiniKit(Qiagen),RTPCR试剂盒(Tayobo)，羊抗鼠单克隆抗体（美国Santacruz公司），兔抗羊二抗（福建迈新公司）。1.2方法1.2.1组织取材：于6：00PM时，将雌雄大

8、鼠以1∶2合笼，次日检测有阴栓者，定为受精0.5d(E0.5)，取E12.5，E15.5和E18.5胚胎胰腺以及新生鼠胰腺；取怀有胚胎E15.5和E18.5的母鼠，引颈椎脱臼处死，分离出胚胎，显微解剖镜下用显微镊子取出胰腺后，迅速在液氮中冷冻。新生、P14、P21和成年鼠直接分离出胰腺［9］。1.2.2RTPCR扩增：根据基因文库cmet的序列，用Primer5.0设计PCR扩增引物。上游引物:5′CCACCCCAATGTTCTCTAC3′,下游