ncam在大鼠不同发育时期视神经和坐骨神经中表达论文

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1、NCAM在大鼠不同发育时期视神经和坐骨神经中表达论文.freellydividedintofivegroups.BothopticnerveandsciaticnervethemanddeterminedtheexpressionofNCAMbyimmunohistochemistry.Theimmunohistochemistrystainingsaticimageanalysistechnology.ResultsTheexpressionofNCAMinthesciaticnervethatofthescia

2、ticnerveintherats.【Keyolecule；opticnerve；sciaticnerve；immunohistochemistry；rat神经细胞黏附分子(neuronalcelladhesionmolecule，NCAM)，是细胞黏附分子的重要成分，具有高度黏附性。它介导神经元之间识别和黏附，在神经系统生长发育和神经再生中发挥着重要作用。本文采用免疫组织化学的方法，研究大鼠不同发育时期NCAM在视神经、坐骨神经内的分布及其变化，从而探讨视神经和坐骨神经的NCAM环境的异同及其与再生能力的关系。1

3、材料与方法1.1动物材料健康雄性Sprague-Dauley大鼠50只(福建医科大学实验动物中心提供)，按出生后7、15、30、45、60天分5组，每组10只。1.2标本的取材、固定和制作大鼠用氯胺酮(10mg/kg)腹腔麻醉，眼科手术显微镜下，沿角巩缘全周剪开球结膜，各肌间钝性分离至球后，暴露视神经，取出眼球壁后视神经长约5mm。于股后部做正中切口，暴露梨状肌下缘至胫腓分叉处的坐骨神经段，切取坐骨神经长5mm。标本经中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，作4μm厚石蜡切片。1.3HE染色石蜡切片烤片过夜，常规脱蜡

4、，苏木精染色，盐酸酒精分色，伊红染色，常规脱水后中性树胶封固。1.4免疫组织化学SP法视神经、坐骨神经石蜡切片，使用SP-超敏试剂盒(福建迈新公司)染色。第一抗体NCAMAb-1(1∶100)为美国NEOMARKERS公司产品。AEC显色，苏木精对比染色，水性封片。切片在同一条件下进行。以PBS代替一抗作为阴性对照。以大脑阳性片作阳性对照。1.5图像分析光镜下，依着色强度分为强阳性、阳性、弱阳性、极弱阳性和阴性。标本经VideoPro32彩色图像分析系统(澳大利亚LeadingEdgePtyLtd)处理，每组取10

5、张不同样本切片，置于光镜(×40)下，每张切片取3个视野，通过彩色图像分析系统，分别测量平均光密度值(OD)。1.6统计学方法对所得的数据进行统计处理，用均数±标准差（x±s）表示。比较NCAM在大鼠坐骨神经及视神经表达的平均光密度值，采用独立样本比较t检验，不同发育时期OD值比较采用方差分析、PostHoct检验，P＜0.05为差异有显著性。2结果2.1HE染色2.1.1视神经(纵切片)有髓神经纤维，纵行走向，纤维细小、结构致密，无清晰的基膜。神经胶质细胞沿纤维走向呈散在的列队状排列。出生后随着年龄增加，胶质细胞

6、数量减少，排列疏散零乱。2.1.2坐骨神经(纵切片)有髓神经纤维，纵行走向，纤维较粗大、结构较疏松，可见清晰的基膜。雪旺细胞与神经内膜紧密相连，顺纤维走向散在分布。出生后随着年龄增加，胶质细胞数量减少，纤维变粗大、相对疏松。2.2NCAM免疫组织化学染色2.2.1NCAM在坐骨神经中的表达NCAM抗体的阳性反应产物呈红色，在不同发育时期坐骨神经膜上，呈不规则的线状分布。随着年龄增加，反应强度逐渐减弱。其中7天组对抗体着色最深，反应为强阳性、深红色(见图1)。60天组对抗体着色较浅，反应产物表现为弱阳性、浅红色(见图

7、2)。2.2.2NCAM在视神经中的表达NCAM抗体的阳性反应产物呈红色，分散在视神经胶质细胞表面。在大鼠出生后60天内，随着年龄增加，对NCAM抗体的反应强度逐渐减弱。在5个年龄组，7天组对抗体的反应略强、着色较深(见图3)，60天组表达最弱(见图4)。2.3计算机图像分析NCAM在大鼠坐骨神经和视神经表达的OD值，见表1。坐骨神经表达水平明显高于视神经。表1NCAM在大鼠不同发育时期坐骨神经及视神经表达OD值注：n=10，与坐骨神经组比较：*P＜0.05；与7天时间组比较，△P＜0.053讨论NCAM是细胞黏附

8、分子的一员，属免疫球蛋白超家族。1987年首次获得NCAM的分子结构。NCAM分为三个区域：形成结合位点的氨基末端，含大量碳水化合物的中央区，以及与细胞膜相连的羧基末端区［1］。电镜下观察NCAM具有3条臂组成的“人”字岛形结构。进一步研究发现它有一绞链，绞链处5个Ig域和一个纤维粘连蛋白结合在一起。由于这个结构NCAM能根据细胞间的相互作用及方向，在细胞之