高效液相色谱法测定保加利亚乳杆菌胞内acetylcoa

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1、-高效液相色谱法（HPLC）测定保加利亚乳杆菌胞内Acetyl-CoA摘要：建立了一种快速测定保加利亚乳杆菌胞内Acetyl-CoA含量的HPLC分析方法。以C18（HypersilODS25μm）色谱柱为固定相，以缓冲液A（0.2mol/L磷酸钠，pH=5）和缓冲液B（800mL0.25mol/L磷酸钠，pH=5和200mL乙腈的混合物）为流动相，梯度洗脱，流速为1mL/min，柱温25℃，采用紫外检测器（254nm）进行检测。结果表明：该方法可以在17min内实现Acetyl-CoA与其他物质完全分离和定量，Acety

2、l-CoA在0.011~0.359μmol/mL范围内的线性关系良好，回归方程线性相关系数R2=0.9995，检出限（以信噪比（S/N）为3计）为0.28mg/L，定量限（以S/N为10计）为0.32mg/L。该方法用于保加利亚乳杆菌胞内Acetyl-CoA含量的测定，相对标准偏差（n=6）为0.75%，重现性良好，三个水平的加标回收率为94.8%~103.3%，该方法适用于保加利亚乳杆菌胞内Acetyl-CoA快速、高效分离和定量。关键词：高效液相色谱，保加利亚乳杆菌，Acetyl-CoADeterminationofi

3、ntracellularAcetyl-CoAinL.bulgaricusbyHPLCAbstract：Ahighperformanceliquidchromatographic（HPLC）methodforthedeterminationofAcetyl-CoAinLactobacillusbulgaricuswasdeveloped.ThestationaryphaseusedwereC18（HypersilODS25μm）chromatographiccolumnandthetwomobile-phasesolvent

4、susedwerebufferA（0.2mol/Lsodiumphosphate，pH5）andbufferB（800mLof0.25mol/Lsodiumphosphatemixedwith200mLpH5ofacetonitrile），gradientelutionandataflowrateof1mL/min，temperatureofcolumnat25℃，theUVdetectorwasemployedtomonitorcolumneffluentat254nm.Resultsindicatedthat：Acet

5、yl-CoAandothersubstanceswerecompletelyseparatedanddeterminedin17min，thelinearcorrelationcoefficientswereabove0.9995intherangeof0.011~0.359μmol/mL.ThelimitofdetectionofacetylcoenzymeAwas0.28mg/L，thelimitofquantitationofacetylcoenzymeAwas0.32mg/L.Undertheseoptimized

6、conditions，therecoveryoftheAcetyl-CoAinLactobacillusbulgaricusatthreespikedlevelswereintherangeof94.8%~103.3%withtherelativestandarddeviations（n=6）of0.75%.ThismethodwasfastandaccurateforthequantitativeanalysisoftheAcetyl-CoAinLactobacillusbulgaricus.Keywords：highp

7、erformanceliquidchromatography（HPLC）；Lactobacillusbulgaricus；Acetyl-CoA中图分类号：TS201.3文献标识码：A文章编号：1002-0306（2013）22-0058-05.---收稿日期：2013－06－04*通讯联系人作者简介：李培照（1986-），男，硕士研究生，研究方向：乳酸菌代谢。基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金新教师类资助课题（20122325120022）；国家自然科学基金项目（31201397）。保加利亚乳杆菌与人类生活关系密切，

8、无论在食品发酵，还是工业乳酸发酵以及医疗保健领域，都被广泛应用，其中最重要的是在牛乳发酵剂方面的应用[1-2]。这些应用都与保加利亚乳杆菌的代谢有直接关系，乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）是三大营养物质糖、脂肪、蛋白质代谢的枢纽物质，是代谢途径中的一种重要辅因子，参与微生物中上百个中间代谢反应[3]，