s100a8a9对心肌肥厚预适应的影响

《s100a8a9对心肌肥厚预适应的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、博士学位论文酮(100mg／kg)腹腔注射麻醉，呼吸机辅助呼吸。胸骨左侧第二肋间开胸，暴露主动脉弓，钝性分离主动脉弓后用7．0号丝线结扎主动脉弓和27G垫针，打结后撤出垫针造成60．80％的血管狭窄。假手术组开胸后，仅用丝线穿过主动脉弓后轻轻的打结，不造成血管狭窄，之后关胸。预适应模型中，在特定的时间后，解开主动脉弓的缝线，解除血管狭窄，一段时间后再次行主动脉弓缩窄术。TAC诱导心肌肥厚预适应实验中，小鼠随机分组，每组6．7只，分为4组：假手术(sham组)、TAC组、TAC预适应1组(PI迮1+TAC组)和TAC预适应2组(PRE2+TAC组)。SHAM组和TAC组分别观察6周；PREI+T

2、AC组在TAC术3d后解除结扎，4d后再次行TAC后观察6w；PRE2+TAC组是在行TAC术后1w，解除结扎1w后再次开胸行TAC后，同样观察6w。1．2超声心动图以及左室血流动力学测定心脏结构功能在TAC术后7d、21d、35d时，超声心动图评估小鼠心脏结构和功能。二维超声在胸骨旁获得左心室短轴图像，M型超声测量左室收缩和舒张末期内径(LvESd、LVEDd)，左室后壁收缩末和舒张末厚度(Pws、Pwd)，计算左室短轴缩短率：LVFS=(LVEDd．LVESd)／LVEDd×100。TAC6w后每组小鼠处死取材前，用Millar导管测定左室血流动力学指标。1．3WesternBlot检测S

3、100A8／A9蛋白的表达水平撤除肥厚刺激对S100A8／A9表达的影响：实验分为4组：1)Sham组；2)TAClw组：行TAC后1w；3)T3dDld组：行TAC术3d后，解除狭窄ld；4)TlwDld组：行TAC术1W后，解除狭窄1d。肥厚预适应刺激对S100A8／A9表达的影响及持续时间：实验分为5组：1)Sham组；2)TAC1w组：行TAC后1w；3)TlwDld组：行TAC术1w后，解除狭窄ld；4)Tlw／Dlw／Tlw组：行TAC术1w后，解除狭窄1w，再行TAClw；5)T1w／D1w／T6w组：行TAC术1w后，解除狭窄1w，再行TAC6w。(二)肥厚预适应上调的S100

4、A8／A9对体外心肌细胞肥厚的作用及机制2．1去甲肾上腺素刺激新生大鼠心肌细胞(NRCs)III万方数据摘要分离培养新生大鼠心肌细胞，实验分为四组：(1)去甲肾上腺素(NE)刺激组：1lamol／L去甲肾上腺素(溶于DMEM培养基)刺激48h；(2)NE预适应1组(PREl+NE)：1pmol／L去甲肾上腺素刺激12h，更换新的DMEM培养基去除刺激12h，再用NE刺激48h；(3)NE预适应2组(PRE2+NE)：1pmol／L去甲肾上腺素刺激12h，更换新的DMEM培养基去除刺激24h，再用NE刺激48h；(4)对照组(control组)：DMEM培养48h。Westernblot检测S1

5、00A8和S100A9的蛋白表达。2．2重组蛋白S100A8／A9对NE刺激的心肌细胞和成纤维细胞的作用分离培养新生大鼠心肌细胞和成纤维细胞，实验分为8个组：(1)NE刺激组：1pmol／L去甲肾上腺素(溶于DMEM培养基)刺激48h；(2)NE+重组蛋白S100A8组(NE+S100A8)：NE和S100A8(1rtg／mL)共刺激48h；(3)NE+重组蛋白S100A9组(NE+S100A9)：NE和S100A9(1“g／mL)共刺激48h；(4)NE+重组蛋白S100A8／A9组(NE+S100A8／A9)：NE和S100A8／A9(1斗g／mL)共刺激48h；(5)对照组(Contr0

6、1)：DMEM培养48h；(6)重组蛋白S100A8组(S100A8)：S100A8(1舭)刺激48h；(7)重组蛋白S100A9组(S100A9)：S100A9(1pg／mL)刺激48h；(8)重组蛋白S100A8／A9组(S100A8／A9)：S100A8／A9(1肛g／mL)共刺激48h。RT．PCR检测心肌细胞ANP，13-MHC和成纤维细胞前胶原I型(procollagenI)和III型(procollagenIII)基因的表达水平，免疫荧光检测心肌细胞面积，Westernblot检测心肌细胞钙调神经磷酸酶(calcineurin)和活化T细胞核因子(NⅣ汀)的核转位。(三)重组慢病

7、毒过表达及敲低S100A8／A9对心肌细胞及成纤维细胞肥厚预适应的作用3．1重组慢病毒的构建及鉴定构建携带S100A8／A9全长编码序列及其干扰RNA序列的重组慢病毒，感染心肌细胞(感染复数MOI=5)，感染24h后更换培养基，继续培养72h后，显微镜下观察细胞荧光，RT．PCR和WestemBlot检测S100A8／A9的表达，鉴定重组慢病IV万方数据博士学位论文毒的感染效率及过表达／敲低的作用