心肌肥厚预适应通过上调s100a8a9抑制心肌肥厚以及延缓心衰进程

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文心肌肥厚预适应通过上调S100A8／A9抑制心肌肥厚以及延缓心衰进程MyocardialHypertrophicPreconditioningAttenuatesCardiomyocyteHypertrophyandSlowsProgressiontoHeartFailurethroughUp—regulationofS100A8／A9课题来源：国家自然科学基金面上项目(NO．31271513)广东省自然科学基金团队项目(S2011030003134)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院吴冰

2、廖禹林教授病理学与病理生理学学术型硕士研究生基础医学院2013年05月12日广州硕士学位论文警丝铆心肌肥厚预适应通过上调S100A8／A9抑制心肌肥厚以及延缓心衰进程硕士研究生：吴冰指导老师：廖禹林教授摘要研究背景与研究目的：心肌肥厚以心肌细胞蛋白合成增加和细胞体积增大为主要特征，是心脏功能从代偿期向失代偿期演变，心脏结构从可逆性改变向不可逆性改变发展的关键阶段，是心力衰竭的重要病理生理基础。虽然一定程度的心肌肥厚可以减轻室壁压力，帮助心肌代偿性适应增加的压力负荷，但是细胞内持续的促肥厚信号刺激是导致心衰进展的主要不利因素。越来越多的实验

3、研究和临床观察注意到，压力负荷的撤除，比如主动脉瓣狭窄置换术后的病人或解除主动脉缩窄后的动物，肥厚的心肌能够得以消退。在撤除压力负荷肥厚消退期间，一些抗肥厚分子发挥着作用。另外有研究报道，间断压力负荷可改善小鼠心功能，并抑制心肌肥厚反应和降低胚胎基因表达水平。但是目前还不清楚的是短期或长期的压力负荷的撤除能否使心脏对后续持续的肥厚刺激产生保护作用。自1986年Murry等首次报道了心肌缺血预适应现象以来，引起了人们极大的关注，即反复短暂的缺血再灌注可以使心脏抵抗后续持续的缺血。除了缺血外，缺氧及药物等也可以引起机体适应现象。那么在机体中是

4、否也存在“心肌肥厚预适应”现象呢?有一项研究报道了在动物实验中，短暂的抗高血压治疗可使抗心肌肥厚作用延长而保护心脏。另外，有研究报道心脏压力负荷撤除后基因表达谱发生了改变，其中一些基因具有抗肥厚作用，这提示我们肥厚刺激因素的撤除可能会产生抗肥厚记忆，但并不清楚这种记忆能持续多长时间。摘要相似程度的压力负荷(如高血压)可能会导致不同程度的心肌肥厚，心肌肥厚在原发性高血压病人中的患病率不到50％，提示一些病人中存在能抵抗肥厚刺激的保护因素。有实验研究证实存在抗高血压非依赖性的心肌肥厚抑制因子。但是如何诱导这样的心肌肥厚抑制因子而使之成为有效的

5、治疗手段，还有待研究。基于以上证据，我们首次提出“心肌肥厚预适应”现象的假设，即短期肥厚刺激可能对后续持续的肥厚刺激有抵抗作用，并延缓心衰进程。本实验的目的在于验证“心肌肥厚预适应”现象，以及探讨其机制。研究方法：1．细胞培养分离培养心肌细胞，实验分为三组：(1)去甲肾上腺素(NE)组：1pmol／L去甲肾上腺素(norepinephrine，NE，溶于DMEM)刺激48h；(2)NE预适应(NE+PRE)组：1pmol／LNE刺激12h，去除刺激12h，再用1pmol／LNE刺激48h；(3)对照(Contr01)组：DMEM48h。普

6、通PCR及Real．timePCR法检测各组心肌细胞心房钠尿肽(ANP)和B肌球蛋白重链(13-MHC)的表达，细胞免疫荧光检测心肌细胞面积。2．药物在体诱导心肌肥厚模型的建立8周龄C57BL／6雄性小鼠，体重20．25g，戊巴比妥钠(50mg／kg)腹腔麻醉。背部手术区域脱毛、消毒。剪开皮肤，将植入式胶囊渗透压泵埋入皮下，缝合皮肤。实验分3组，每组6—7只：(1)PE(phenylephrine，PE；苯肾上腺素)组：PE束IJ激4d；(2)PE预适应组：PE束IJ激1d后，休息1d，然后PE束IJ激2d，休息2d，最后PE再刺激4d；

7、(3)对照组则是用药物溶剂维生素C刺激4d。4d后检测心重体重HS(HW／BWmg／g)。PE用量为30mg／kg／d。3．主动脉弓缩窄(TAC)诱导心肌肥厚模型的建立8周龄C57BL／6雄性小鼠，体重约20-25g，戊巴比妥钠(50mg／kg)腹腔麻醉，人工呼吸。胸骨左侧第二肋间开胸，暴露主动脉弓。钝性分离头臂干和左颈总动脉之间组织，7-0丝线结扎主动脉弓和27G垫针，撤出垫针造成60．80％的II硕士学位论文血管狭窄。4．超声心动图测定心脏结构及功能在TAC术后35d，采用M型超声心动图对小鼠心脏结构和功能进行评估。测量左室收缩和舒张

8、末期内径(LVESd、LVEDd)，左室后壁收缩末和舒张末厚度(Pws、Pwd)，计算左室短轴缩短率：LVFS=(LVEDd．LVESd)／LVEDd×100。5．组织学检测小鼠心脏置于4％多