runx3通过上调mir29b表达来抑制胃癌增殖及迁移的分子机制

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1、CoNTENTSChineseabstracts．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．】【Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5Abbreviations．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9Preface．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10Materialandmethods，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

2、．．．．．1：；Results．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35Discussions．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41Figuresandtables．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44References．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

3、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57Acknowledgements．．．．．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63Publishedarticles．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．+64万方数据山东大学硕士学位论文RUNX3通过上调miR-29b表达来抑制胃癌增殖及迁移的分子机制专业：生物化学与分子

4、生物学研究生：孔叶导师：刘志方中文摘要背景：胃癌在世界范围内是一种高发的恶性肿瘤，特别是在中国，胃癌的发病率高，预后差，病人的存活期限短，因此探讨胃癌发生发展的分子机制，寻找有效的诊断标志及治疗靶点是胃癌早期识别和干预的关键环节。RUNX3是Runt转录因子家族成员之一，其分子中含有高度保守的Runt结构域，Runt结构域可介导RUNX3蛋白与靶基因启动子区特定DNA结合元件的相互作用，从而调节靶基因的转录。目前研究认为，RUNX3是一种肿瘤抑制因子，可与TGF一13信号途径下游的Smad3／4相互作用，激活细胞周期抑制蛋白p21、促凋亡

5、分子Bim等表达，从而促进细胞周期停滞及细胞凋亡；RUNX3还可直接靶向激活Claudin一1，抑制Aktl、VEGF等，从而抑制胃癌发生、转移及血管生成。但RUNX3作为一种转录因子能否通过调节非编码的microRNA表达来发挥其生物学功能11前尚不完全清楚。本论文中，我们首先用miRNA芯片筛查了RUNX3所调节的miRNAs，发现RUNX3过表达后miR．29b上调最为显著，用生物信息学分析miR一29b的启动子，发现启动子区存在假定的RUNX3的结合位点，因此，我们选择miR-29b作为研究对象。我们用qRT-PCR验证了芯片结果

6、，并探讨了RUNX3调节miR一29b表达的机制及IⅧNX3通过调节miR一29b影响细胞增殖及迁移的分子机制。目的：万方数据山东大学硕士学位论文探讨RUNX3调节胃癌细胞中miR．29b表达的分子机制；解析miR-29b在胃癌中的生物学功能及其调控的下游靶基因；并阐明RUNX3能否通过调节miR．29b来抑制胃癌细胞的增殖及迁移。方法：1．将RUNX3过表达质粒及针对RUNX3的干扰siRNA及其相应的对照转染胃癌细胞，利用qRT-PCR检测不同转染对胃癌细胞中miR-29b表达的影响。2．利用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验检测RUN

7、X3蛋白与miR．29b启动子区相应结合元件在细胞内的相互作用。3．构建miR．29b启动子．荧光素酶报告基因载体及RUNX3结合位点发生突变的突变载体，利用荧光素酶活性检测实验检测RUNX3对miR-29b启动子活性的影响。4．将Smad3过表达质粒及相应的对照载体分别转染胃癌细胞，利用qRT-PCR及双荧光素酶活性检测实验分别检测Smad3对miR．29b表达的影响及对miR-29b启动子活性的影响。将RUNX3与Smad3过表达载体共转染胃癌细胞，荧光素酶活性检测RUNX3能否与Smad3协同增加miR-29b的启动子活性。5．用q

8、RT-PCR检测RUNX3和miR．29b在胃癌和癌旁组织中的表达，统计学分析胃癌组织标本中RUNX3与miR．29b表达的相关性。6．在胃癌细胞中转染miR．29bmimics及inhibi