rn181在胃癌中的表达及调节胃癌细胞增殖机制的研究

《rn181在胃癌中的表达及调节胃癌细胞增殖机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2010级硕士学位论文RNl81在胃癌中的表达及调节胃癌细胞增殖机制的研究ExpressionofRNl81inGCandMechanismofRNl81regulatingcellproliferationinGastriccarcinomacelllines课题来源：国家自然科学基金(81171959)学位申请人王小波导师姓名李明教授专业名称免疫学培养类型学术型培养层次硕士研究生所在学院生物技术学院2013年5月6日广州硕士学位论文删RN181在胃癌中的表达及调节胃癌细胞增殖机制的研究硕士研究生：王小波指导教师：李明教授摘要背景

2、：胃癌(GastricCarcinoma，GC)是人类常见的恶性肿瘤之一，在我国居恶性肿瘤之首。近年来，随着诊断技术的进步及针对肿瘤的外科手术和放化疗治疗策略的成熟，胃癌的整体5年生存率有所提高，但术后胃癌的复发率仍居高不下，预后效果并不令人十分满意。目前，大量的研究结果证实胃癌的发生、发展和预后是多基因、多因素及多阶段改变的结果。所以研究胃癌相关基因及其蛋白分子不仅在了解胃癌的发病机制方面十分重要，而且在临床靶向性治疗和改善预后等方面也意义重大。肿瘤细胞无限制的增殖多与细胞周期密切相关。细胞周期(cellcycle)是指连续分裂的细胞从上一次

3、有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程，一般可分为：G0期(静息期)、G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期(DNA合成后期)、M期(有丝分裂期)；包含两个主要检验点，即G1／S检验点(DNA合成起始转换点)和G2／M检验点(有丝分裂诱导转换点)，通过检验点后，即使刺激信号被去除，细胞仍然会开始DNA复制。细胞周期是多阶段、多因子参与的精确而有序的调控过程，可分为外源性和内源性调控。外源性调控主要是由外界理化刺激引起；而内源性调控主要是通过对细胞周期蛋白(Cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin．depe

4、ndentkinase，CDKs)、细胞周期依赖性激酶抑制因子(CDKinhibitors，CKIs)三者的调控来实现。众所周知，摘要恶性肿瘤的明显特点为细胞凋亡障碍和增殖失控，大量的研究表明细胞周期的失控与肿瘤的发生、发展有着密切关系。所以研究肿瘤中细胞周期相关分子的变化有助于揭示肿瘤发生发展的机制以及对临床治疗具有指导意义。人RNl81基因，又名HSPC238、RNFl81(ringfingerprotein181)，全长716个碱基，编码153个氨基酸，因其第40至60氨基酸残基能够形成特殊的RING指结构域而得名。2008年Brophy

5、等首次证实RNl81具有E3酶活性。本实验室前期研究首次证实RNl81可以通过ERK／MAPK途径抑制肝癌细胞HepG2、SMMC7721的生长。然而对于RNl81在其它肿瘤中的作用，以及调节肿瘤的具体作用机制仍是知之甚少。酵母双杂交系统(yeasttwo．hybridsystem)是一种直接用于检测细胞内蛋一蛋白相互作用的具有高灵敏度且通用的实验室方法，利用酵母体内特殊的GAL4转录调控因子，把待检测存在相互作用的两个蛋白质(X，Y)的编码基因分别与GAL4的DNA结合结构域(DNA．bindingdomain，BD)和转录激活结构域(tra

6、nscriptionactivationdomain，AD)融合，通过下游报告基因的的筛选，得到存在相互作用的蛋白分子。所以，本实验以临床上高发的胃癌为研究对象，通过细胞学实验、分子生物学实验、酵母双杂交等现代常用实验技术，对RNl81在胃癌中的生物学功能以及在细胞周期方面的调节作用和具体机制进行研究。目的：1明确RNl81在临床胃癌组织中的表达情况及其与胃癌发生发展的关系。2明确RNl81在胃癌细胞生长方面的具体生物学作用。3在体内外阐明RNl81对胃癌细胞周期的影响及相关机制。4通过酵母双杂交实验寻找与RNl81直接相互作用并参与细胞周期调

7、节的分子。方法：1采用免疫组织化学染色的方法在165例临床胃腺癌组织中，分析RNl81的表达量与临床胃癌发生、发展的关系。2基于基因克隆技术，将pcDAN3．1(-)-flag／RNl81中的RNl81片段亚克隆硕士学位论文到逆转录病毒包装质粒plncx2．GFP．IRES中，经酶切、测序和Westernblot鉴定正确无误后，与pVSV-G共转染至GP2．293细胞中进行病毒包装。将包装的高表达逆转录病毒感染胃癌AGS细胞，而后经低浓度G418初步筛选；同时将购买的RNl81(上海吉玛公司提供)干扰慢病毒感染胃癌AGS、MKN28和MKN45

8、三种细胞，经流式分选得到带绿色荧光的稳定细胞系，通过RT-PCR、Westernblot鉴定后，扩大培养、冻存。3CCK．8法检测稳定高表达RNl81