MMP-11在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究

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1、暨南大学博士学位论文题目（中英对照）：MMP-11在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究StudyontheroleofMMP-11intheproliferationandinvasionofgastriccancercellsandthemechanism作者姓名：苏超指导教师姓名及学位、职称：王存川博士教授学科、专业名称：外科学论文提交日期：2018年5月25日论文答辩日期：2018年6月4日答辩委员会主席：陈积圣教授论文评阅人：学位授予单位和日期：1MMP-11在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究22[MMP-11在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究]MMP-11在胃癌

2、细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究中文摘要胃癌（GC，gastriccarcinoma）是一种常见的恶性肿瘤，其发病率在世界各类癌症中排第四位，死亡率排第二位，许多GC患者就医时已是癌症的进展晚期，临床医治的疗效和预后差，严重危及和降低了国民的生活品质，是亟待解决的重大公共卫生问题。GC发展的生物学过程非常复杂，由多种因素、基因和不同步骤共同作用导致，而对其发病的确切分子机制现有文献尚未报道。因此，研究GC细胞增殖和侵袭的分子生物学机制，并找出与之有关的生物学标志物，是GC临床医学研究的主要方向。基质金属蛋白酶家族(MMPs)与许多癌瘤的产生、进展和预后关系密切。MMPs在细胞外基质

3、(ECM)的降解、肿瘤细胞的粘附和运动中发挥重要作用，与肿瘤的产生、侵袭和转移有关。MMP-11属于MMP家族中的间质溶素，关于其对肿瘤作用机理的报道有限，其可能是通过胰岛素样生长因子-1（IGF-1）途径对癌瘤的产生、进展过程，包含抗细胞凋亡，细胞增生，细胞粘连吸附，血管形成等进行介入和影响。IGF家族在恶性肿瘤的产生和进展中发挥关键作用，其中IGF-1是一种具有高强度的有丝分裂原，通过IGF-1受体（IGF-1R）发挥其在机体内的生物学作用。IGF-1单链分子量为7649kDa，由70个氨基酸组成，它在细胞生长和代谢的调控方面作用重大。为了探索MMP-11在GC发病过程里的作用

4、及机制，本研究以临床GC样本及GC细胞系SGC-7901为实验对象，通过基因转染，运用免疫组织化学方法、流式细胞检测技术、实时荧光定量RT-PCR、蛋白印迹（WB）等手段系统研究MMP-11和IGF-1在不同分期和分型GC细胞中的表达，及通过不同的干预方法测定MMP-11和IGF-1对GC细胞增殖和侵袭的影响，并探索MMP-11是否通过影响IGF-1的表达来促进GC细胞生长。3MMP-11在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究第一部分MMP-11和IGF-1在胃癌组织中的表达目的：本部分实验旨在探讨不同分型和分期GC组织中MMP-11和IGF-1的表达情况。方法：选取202例确诊并

5、接受手术治疗的GC患者，选取与肿瘤边界间距大于5cm的癌旁非肿瘤胃粘膜组织，作为正常对照组；GC组织样本取材于癌性溃疡凹陷内侧壁。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IGF-1和MMP-11在肠型和弥漫型以及不同分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期GC组织和相应的癌旁组织的相对表达状况；应用蛋白印迹法测定IGF-1和MMP-11在肠型和弥漫型以及不同分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期GC组织和相应的癌旁组织的蛋白表达。结果：经RT-PCR和蛋白印迹测定，与正常对照组的癌旁组织相比较，MMP-11在肠型和弥漫型GC组织中表达明显上升，且MMP-11在弥漫型GC组织中的表达显著大于肠型；MMP-11水平随着

6、GC临床分期的递增而增加，在Ⅲ期GC组织中的表达显著高于Ⅰ期，在Ⅳ期GC组织中的表达显著高于Ⅰ期和Ⅱ期。经RT-PCR和蛋白印迹测定，与正常对照组的癌旁组织相比，IGF-1在肠型和弥漫型GC组织中表达明显上升，且IGF-1在弥漫型GC组织中的表达显著大于肠型；IGF-1水平随着GC临床分期的递增而增加，在Ⅲ期GC组织中的表达显著大于Ⅰ期，在Ⅳ期GC组织中的表达显著大于Ⅰ期和Ⅱ期。结论：GC发生能引起MMP-11和IGF-1表达水平升高，MMP-11和IGF-1的表达与GC细胞的分型和分期相关，表明MMP-11和IGF-1可能对GC的发生、发展及分化有不可忽视的影响。第二部分MMP-

7、11干预对IGF-1在胃癌细胞中的表达及作用机制目的：本部分实验的目的是为了探讨MMP-11干预对IGF-1表达水平的影响及作用机制。方法：购买人GC细胞SGC-7901，将其随机分为5组：rh-MMP-11干预（SGC-7901培养基中加入25、50、100ng/mlrh-MMP-11）、NT157干预（SGC-7901培养基4[MMP-11在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制研究]中加入50ng/ml的rh-MMP-1124h后，再加入5、10μMNT157）、白皮