重叠延伸pcr法构建肿瘤抑素核心活性部位t3肽

《重叠延伸pcr法构建肿瘤抑素核心活性部位t3肽》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重叠延伸PCR法构建肿瘤抑素核心活性部位T3肽顾丽1张君2高静3苏燕4（通讯作者）（1头医学院病原生物学教研室内蒙古头014060）（2民航总医院检验科北京100123）（3头医学院病原生物学实验室内蒙古头014060）（4毡头医学院生物化学与分子生物学教研室内蒙古毡头014060）【摘要】目的利用重叠延伸PCR技术，构建肿瘤抑素核心活性部位T3肽。方法根据T3肽CDNA序列，人工设计合成三段引物，采用重叠延伸PCR技术扩增目的基因片段T3,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对其进行分离后，纯化回收扩增产物。将纯

2、化回收的T3片段克隆至T载体，转化大肠杆菌DH5α，选取阳性克隆，提取质粒，双酶切电泳鉴定后进行DNA序列测定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增获得预期大小的目的基因。质粒测序显示目的基因序列与GenBank中记载的cDNA序列完全一致。结论成功构建T3肽基因序列。【关键词】肿瘤抑素T3肽重叠延伸PCR【中图分类号】R318【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）03-0020-02Overlap-extensionPCRtoconstructthecoreactivi

3、tysiteT3peptideoftumstatinGULil,ZHANGJun2,GAOjing3,SUYan3*（1.DepartmentofpathogenBiology,BaotouMedicalCollege,InnerMongoliaBaotou014060;2.LaboratoryofGeneralHospitalofCivilAviation,Beijing100123;3.PathogenBiologyLaboratoryofBaotouMedicalCollege,InnerMong

4、oliaBaotou014060;々.Departmentofbiochemistryandmolecularbiology,BaotouMedicalCollege,InnerMongoliaBaotou014060,China）【Abstract】ObjectiveToconstructthecoreactivitysiteT3peptideoftumstatinbyemployingtheoverlapextensionPCRMethodsAccordingtothecDNAsequenceofT

5、3peptide,designedandsynthesizedthreeprimerstoamplifythetargetgenefragmentT3usingoverlap-extensionPCRtechnique.Theamplificationproductswereseparatedandpurifiedbymeansofnondenaturingpolyacrylamidegelelectrophoresis.ThepurifiedT3fragmentwasinsertedintoTvect

6、or,thentransformeditintoEscherichiacoliDH5α.Theplasmidwasextractedfrompositiveclones,andthenidentifiedbydoubledigestion.Thisrecombinantplasmidcontainingthetargetgenewassequenced.ResultsAgarosegelelectrophoresisshowedthattheexpectedsizeofgenefragmen

7、twasamplified.PlasmidDNAsequencingshowedthatthetargetgenesequencewasthesameasthecDNAsequencerecordedinGenBank.ConclusionThegenesequenceofT3peptidewassuccessfulconstructed.【Keywords】TumstatinT3peptideOverlap-extensionPCR抗血管新生(angiogenesis)理论［1,2］认为，肿瘤的生长、

8、浸润和转移都有赖于新血管的生成，如果新生血管的生成被抑制，则细胞的营养供位被阻断，肿瘤细胞便无法增生和转移，其至发生坏死或凋亡。肿瘤抑素(tumstatin)是最新发现冋吋也是0前己知的活性最强的内源性血管生成抑制因子，它靶向作用于分裂型血管内皮细胞，通过特异性抑制内皮细胞的蛋白质合成，诱导内皮细胞的凋亡，进而抑制内皮细胞的增殖和迁移，使肿瘤生长所必需的新毛细血管的形成被抑制，从而抑制肿瘤的生长、浸润和转移［3-5］。Tumstatin是来