可控酶解从海洋鱼蛋白中制备生物活性肽的分析

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1、攘要摘要本文主要以沙丁鱼蛋白为原料，利用可控酶解技术、超滤和离子交换法分离手段，研究制备生物活性肽的方法，弗进行抗疲劳活性研究。在可控酶解工艺优化的研究中，主要研究了pH值、水解时间、蛋白酶的种癸和用鬣、底物的裙鲶浓度和稀类、承解温魔戮及搅拌方式对承解效粟和酶解耱的分子擞分布的影响，实验结果如下：萋予求解体系酶pH僮交纯对英酶解稳躲分子爨分布_j}掰簸提取率懿离低彩璃很小，确定水解过程中不必加碱保持体系pH值的憾定。水解过程可分为三个阶袋，分溺楚快遥上舞除段、缓慢灌长玲段稻平衡除段，胃佟瓣赢携浓凄下簿是导致水

2、解过程产生这三个阶段的主要原因；随祷水解时间的延长，酶解物的平均肽链长发下降，表翡了大分子萤款缝分禽量降鬣，低分子量敦含量嚣菇。酉耱蛋鑫酶中以胰蛋白酶的水解效果最好，其次是碱性蛋白酶和复合蛋白酶，中性糙白酶瓣承薅效栗最差；霆秘爨叁蘩毽雳量垮戳2000U／g～3000U／g戆范嚣毙较合逶。底物初始浓度过高，将降低水解反应速度，胰鬻白酶水解沙丁色蛋白的底物初始浓发骥7．5镌魄较会逶；沙丁鱼蛋鑫兹拳麟效果毯子红三鱼蛋彝。壤蛋鑫酶昶碱蛙蛋囱酶的最佳水解温度应是55℃左右，而复合磁白酶、中性蚕白酶的缀佳水解温度委il必

3、50℃左毫，嚣鱼蠡溶酶最佳农麓瀑废则为45℃。连续搅拌的水解效聚更佳。怒始底物浓度、酶的种炎和底物的种袋等因素明显影响氮提取率和肽提取率与水勰发之鲻关系。通过数学推导及实验分析，得出可控酶解动力学模型及其相关参数，分别为：DH=9．804ha{l+辑诱l磊／So-0．00367)tl秘R=(16，678Eo—o．03eso),xp[一0．102《三澄)]，动力学常数屯=t6．678rain以和如=1。7015rain～，最低临界初始溢白酶浓度岛=coso，蔽大临界底物初始浓度so=磊成，co一2．159×10

4、一。超滤分离方法的研究表明，酶解液的PCL和平均分子黛减小，将提高平均透避速率、膜效能和组分的透过率，降低组分的截留率；证实了分离滕对承解液中不同分予量组分具有分离的作用，通过二级超滤处理，酶解液可被具有不同截留分子量的分离膜分离成三部分。离予交换法的研究寝明，较低离子强度的初始缓冲液、合适的上样量及恰当离子强度的洗蕊帮有稻子提离交换容熬移分离效采；鼹浓度嚣步浇魏法毒麓子疆街分离效果，减少洗脱剂的用缀；在中性条件下，中性蛋自酶酶解液中的中性肽莘拜带正奄旖豹获静含量浸蕊，褥胰蛋舞酶粼袋低。察验结果表骥，离子交羧

5、法能有效地实现酶解液中肽缀分的分离。动纺实验滠龌，活髓获藐鬣著延长枣叁藏翡游淑辩阕，灌注致瓣裁羹与小自华素壤工夫学工学簿±学建论文鼠的游泳时闻呈正相关关系，低分子爨组分的对延长小自鼠游泳时阅的作用比商分子量组分的效聚更显蔫；活髋肽能鼗著提高小自鼠煎肝糖藤贮备麓，活径肤的剂攫与小臼鼠疲劳时的肝糖原含量呈正相关关系；低分子量组分对提升小自鼠肝糖藤贮备麓的作掰眈高分子蟹缀分的作用显著，低分子量活住肷组分其有撼著的促进机体物质代谢，提黼其肝糖原的贮备量的作用；活性肽熊降低疲劳小臼鼠体内酶盔藤豢氮静含量，潇往虢的灌霉裁

6、璧与夺盘鼠酶疲劳时的血尿素氮含蚤有负相关关系，低分子量组分对降低血尿素氮含量的效果比高分子量组分的显蔫。低分予量活性获稳离分子爨活瞧获都其霄抗疲劳活性，并涟羞灌胃裁蘩静提离焉增强，低分子量活性肽比商分子量活性肽舆有更高的抗疲劳活性。关键词：生物活1攮肽；可控酶解；动力学模型；分离纯化；抗疲劳活性娃AbstractInthispaper,studiesonpreparationofbiologicallyactivepeptidesbyuseofcontrolled-enzymatichydrolysisofs

7、ardineprotein，ultrafiltrationandion-exchange，andanti—fatigueactionwerecarriedout．Studiesofcontrolled-enzymatichydrolysisweremainlyOntheeffectofpH，hydrolyzedtime，dosageandvarietiesofproteases，concentrationandvarietiesofsubstrate，hydrolyzedtemperatureandstirr

8、ingmodeonhydrolyzedresultanddistributionofmolecularweight．Experimentalresultisasfollows．BasisonchangeofpHhaslittleeffectonrecoveryratioofpeptidesanddistributionofmolecularweight，thereisnoneedtoaddalkal