大鼠大网膜肝片移植的实验研究

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1、大鼠大网膜肝片移植的实验研宄许桂祥1刘智伦1周世龙1徐硕1王琳1许准2薛冰川2张桂欣1（1青岛阜外心血管病医院普外科山东青岛266034；2山丙医科大学第三医院山丙太原030053）【摘要】目的研究自体肝片大网膜移植后，肝片生长情况，为肝脏外科临床及实验研究提供理论依据。方法Wistar大鼠20只，随机分为4组,5只大鼠均左外肝叶切除自体肝片大网膜移植，分别于术后3、7、14、21d分批处死动物。肉眼观察移植物颜色、大小及粘连情况，HE法染色，常规光镜观察移植肝片在不同时期的组织学特点。结果自体肝片移植术后3d

2、即有血管从移植肝片周围大网膜向肝片内伸展，伴肝细胞凝固性坏死，随时间推移肝片进一步坏死至消失。结论自体肝片大网膜内移植是简便的肝移植方法，但其存活性有待进一步深入研究。【关键词】肝脏自体移植大鼠20世纪30年代Cameron和Oakley已开始了肝碎片在自体大网膜移植的基础实验。科学家们试图异位移植肝碎片，但大多数病例肝组织在数日或数周内即退化或消失，笔者查阅相关文献，不曾找到相关实验资料和文献报道。因此，木实验是一探索性实验。以大鼠为研究对象进行自体肝片大网膜移植，在不同时间观察移植肝片的存活情况。1材料和方

3、法雌性Wistar大鼠20只，体重200〜250g,购自青岛大学医学院动物实验中心。随机分为移植3d组（A组）、移植1周组（B组）、移植2周组（C组）、移植3周组（D组，以上4组均n=5）。移植动物模型制作：在以0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉下，取上腹正中切口，切下鼠肝左外叶浸于含肝素钠25IU/ml的4度乳酸林格液10ml中，沿肝脏表面切制成厚为0.3cm、边长为0.5cm的长方体形无被膜的肝片4片，生理盐水冲洗干浄后移植于大网膜2层间，固定1针，用未移植肝片的大网膜继续包埋移植的肝片，适当

4、间断缝合固定，使肝片和大网膜旮效压容。移植后单独隔离喂养3d,每日肌注青霉素8万单位/只，然后群居饲养。检测指标:于术后3d、1、2、3周（每组只数n=5）分批处死动物，进行下列检测:①肉眼观察移植物颜色、大小及粘连情况。②HE法染色，常规光镜观察移植肝片在不冋吋期的组织学特点。2结果大鼠大网膜移植肝片大体形态学观察结果见表1。表1肝片移植大鼠大网膜大体形态学观察A组粘连的1例为网膜与肝脏粘连，1例为网膜与腹壁粘连，2例为网膜与肠粘连。B组粘连的2例中全部为网膜与肠粘连。常规光镜检查：A组结构散乱，大片坏死肝细

5、胞，与大网膜交接处散在新生毛细血管，肝片中央出现坏死区，肝片周边出现少量粒细胞、巨噬细胞及其他细胞。B组：肝细胞全部坏死，中心坏死区进一步扩人，人范围出现边缘冇迁移的粒细胞、巨噬细胞及其他细胞。C组：无存活的肝细胞，肝细胞凝固性坏死。3附图4讨论大网膜具有丰富的血管网和再血管化功能，当其与其它组织接触后6小时，即开始有毛细血管生长，并与其它组织发生纤维素粘连,24小时内两者之间的粘连逐渐致密，至48〜72小吋，可见肉芽组织生长［1］。实验预期结果应是随着吋间的推移，“肝片血管化”进程日臻完善，即大网膜周围血管长

6、入移植的肝片的密度变大，而此实验出现的事实是肝片不能存活，其原因有待进一步探讨。笔者分析原因可能有：一、麻醉问题，水合氯醛在肝脏中代谢，有肝毒性，腹腔注射麻醉，移植的肝片首当其冲，而11其解毒功能相当脆弱，10%的水合氯醛可能直接使移植的肝片致死；二、在切取移植肝片过程中，缺血冷灌注致使肝细胞受损，从结扎肝左外叶根部到置于含肝素钠25IU/ml的4度乳酸林格液10ml中，沿肝脏表面切制成厚为0.3cm、边长为0.5cm的长方体形无被膜的肝片4片，再到生理盐水冲洗干净后移植于大网膜2层间，固定1针，整个过程耗吋约

7、6〜8分钟，势必产生大量的氧自由基等损伤肝细胞的因子，即移植的肝细胞是受损伤的肝细胞；三、固定一针的问题，幕丝线贯穿移植肝片中央，使大网膜与苏充分压容，一方面影响包埋肝片的大网膜血管，另一方面是异物，有可能引起免疫排斥反应，严重的炎症反应会使肝片存活环境进一步恶化；四、移植土壤的问题，大网膜富有大量巨噬细胞，誉有“游走警察”之称，不管从C、D两组粘连例数，还是从幵腹肉眼观察到大网膜及腹腔异常光滑来看，大网膜的自净能力确实很强，连固定肝片的幕丝线都消失，人网膜对移植的肝片有无消化吞噬作用，是一个问题。五、移植肝片

8、在移植到大网膜后，靠组织液存活，与大网膜交界处的肝细胞能存活，肝片的中央因缺乏足够营养而坏死，这与从常规光镜检査下A组结构散乱，大片坏死肝细胞，与大网膜交接处散在新生毛细血管，肝片中央出现奶酪样坏死区，肝片周边出现少量粒细胞、巨噬细胞及其他细胞，即肝细胞缺血凝固性坏死，大致是相吻合的；也就是说移植的肝片太厚，周围人网膜血管长入肝片过程相对滞后，本实验肝片厚度为0.3mm，而即使肝片两面