肝细胞移植对大鼠实验性肝衰竭的疗效研究

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1、肝细胞移植对大鼠实验性肝衰竭的疗效研究摘要:目的探讨同种异体肝细胞经腹腔、门静脉移植对D-氨基半乳糖（D-gal）诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用.方法采用D-gal诱导大鼠急性肝衰竭，诱导后60h，分4组进行治疗实验，Ⅰ组:经门静脉移植2×107肝细胞，同时肌注环孢霉素A（CsA）10mg・kg-1;Ⅱ组:经门静脉注射生理盐水1mL，同时肌注CsA10mg・kg-1;Ⅲ组:经腹腔移植4×107肝细胞;Ⅳ组:经腹腔注射生理盐水2mL，观察大鼠的存活率、肝脏功能、病理变化.结果Ⅰ组大鼠存活率与Ⅱ组无明显差异（4

2、2%vs37%，P>0.05），肝脏功能、病理无明显改善.Ⅲ组大鼠存活率显著高于Ⅳ组（75%vs33%，P<0.05），肝脏功能、病理均有部分改善.结论经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率，部分改善肝功能、病理;经门静脉移植同种异体肝细胞不能改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率、肝脏功能及病理改变.　　Keyine.METHODSAHFratsg・kg-1simultaneously.GroupⅡreceived1mLofnormalsaline（N.S）throughven

3、aportaeg・kg-1.GroupⅢreceived4×107hepatocytesintraperitoneally.GroupⅣreceived2mLN.Sintraperitoneally.Thenthesurvivalrates，liverfunctionandliverhistologyofallratsilartothatofGroupⅡ（42%vs37%，P>0.05），andliverfunc-tionandliverhistologyofGroupⅠprovedsignif-icantlyas

4、paredprovedinGroupⅢasparedproved.But，thesurvivalrate，liverfunctionandliverhistologyofAHFratsthroughvenaportaeHcTisnotimproved.　　0引言　　急性肝衰竭（ALF）或亚急性肝衰竭（SALF）是各种肝脏疾病特别是病毒性肝炎的主要死因之一［1，2］，肝脏移植被认为是对其最有效的治疗方法［3］.但由于受到价格昂贵、供体短缺、供体肝保存困难、移植物功能障碍、术后感染及不能耐受等问题的影响.目前，在我国广泛开展肝脏移植以治疗

5、肝衰竭仍面临许多困难.肝细胞移植具有简单易行、供体肝细胞保存方便、应用灵活、对受体影响小及价格相对低廉等特点，近年来得到较快发展，成为继原位肝移植后又一治疗各种肝功能衰竭的有较好效果和应用前景的方法［4-6］.我们采用D-氨基半乳糖（D-gal）诱导大鼠肝衰竭，经门静脉、腹腔移植同种异体肝细胞治疗急性肝衰竭大鼠，观察急性肝衰竭大鼠存活率、肝脏功能、病理的变化，以期为临床开展肝细胞移植提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料成年雄性SD大鼠180只，体质量（189±52）g，由第四军医大学实验动物中心提供，实验室温20～25℃，实验前1

6、2h禁食.IV型胶原酶、DNA酶I购于Sigma公司，D-gal购于重庆医科大学.全自动生化分析仪购自Simens公司.　　1.2方法　　1.2.1急性肝衰竭模型的建立大鼠腹腔内注射不同剂量（1.2，1.4，1.6，1.8，2.0，2.2g・kg-1）的D-gal，根据动物死亡率、肝脏病理及功能损害选择1.6g・kg-1D-gal为大鼠急性肝衰竭的最适诱导剂量.　　1.2.2肝细胞的分离纯化2g・L-1戊巴比妥钠溶液以30mg・kg-1腹腔麻醉大鼠，同时腹腔内注射200IU肝素钠

7、溶液.消毒皮肤，显露游离门静脉后在距肝门2cm处插入18号导管，用D-Hanks液（含0.01g・L-1EDTA，37℃，pH7.4，通以含950mL・L-1O2及50mL・L-1CO2的混和气体）以20mL・min-1的速度灌入，随后于肝下后静脉插入16号导管放出积血、积液，并剪开胸腔，夹闭肝上后腔静脉.灌注5min后改为含0.05g・L-1胶原酶，0.01g・L-1DNA酶Ⅰ的Hanks液（37℃，pH7.4，通以含950mL・L-1

8、O2，50mL・L-1CO2的混合气体）持续灌注5min.取下肝脏，置于含4℃Han-ks液的平皿中，剪下肝被膜，疏下肝细胞，以单层无菌纱布过滤，制成混合细胞悬液.将灌注剩余的胶原酶溶液倒入悬液中，并以Ha