永生化肝细胞移植治疗肝衰竭

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1、永生化肝细胞移植治疗肝衰竭作者：李羽，王军，徐哲，张岩，白雪帆【关键词】永生化　　Immortalizedhepatocytetransplantationfortreatingliverfailure　　【Abstract】AIM:Tostudytherolesofimmortalizedandprimaryhumanfetalhepatocyteintrasplenicaltransplantationsintreatingtheratsine(Dgal).METHODS:ALFratsmortalizedhumanfetalhepatocytesintrasp

2、lenically;ratsofgroupⅡrecEIved2×107primaryhumanfetalhepatocytesintrasplenically;ratsofgroupⅢreceived1mLnormalsalineintrasplenically.AllratsreceivedCyclosporinA(CsA)at10mg/kgimsimultaneously.Thenthesurvivalrates,liverfunctionandliverhistologyofallratsprovedsignificantlyasparedanfetalhep

3、atocytetransplantationintrasplenically,thesurvivalrateofALFratsintoxicatedproved.Theimmortalizedhepatocytesaterialinthestudyofhepatocytetransplantation.　　【Keymortalization;fetalhepatocytes;transplantation;liverfailure,acute;Dgalactosamine　　【摘要】目的：观察永生化胎肝细胞及胚胎肝细胞经脾脏移植对D氨基半乳糖（Dgal）诱导的急性肝

4、衰竭大鼠的治疗作用.方法：采用Dgal诱导大鼠急性肝衰竭，分3组进行治疗实验，Ⅰ组：经脾脏移植永生化胎肝细胞2×107个；Ⅱ组：移植原代胚胎肝细胞2×107个；Ⅲ组：脾脏注射生理盐水1mL，各组大鼠同时肌肉注射环孢霉素A(CsA)10mg/kg.观察大鼠的存活率、肝脏功能、肝脏病理变化情况.结果：Ⅰ组及Ⅱ组大鼠存活率均显著高于Ⅲ组大鼠（72.2%vs22.2%,61.1%vs22.2%,P＜0.01），肝脏功能及肝脏病理均有改善,Ⅰ组与Ⅱ组之间大鼠存活率无明显差异(72.2%vs61.1%,P＞0.05).结论:经脾脏移植胚胎肝细胞可明显改善Dgal诱导的肝衰竭大鼠

5、的存活率，改善肝功能及肝脏病理，该永生化胎肝细胞可以成为肝细胞移植研究中的理想细胞材料.　　【关键词】永生化；胚胎肝细胞；移植；肝功能衰竭，急性；D氨基半乳糖　　0引言　　肝功能衰竭是各种肝脏疾病患者死亡的主要原因.目前原位肝脏移植是挽救肝衰竭的惟一有效方法，但由于受到肝脏供源及手术费用等因素的限制，目前在我国广泛开展肝脏移植治疗肝衰竭仍面临许多困难.肝细胞移植作为一种简便有效且对机体影响较小的技术愈来愈受到关注［1-5］，与肝移植相比，它具有以下优点：①一个供体可以给多个受体提供细胞；②移植技术相对简单；③即使移植失败，对受体影响也十分微小.肝细胞移植近年来得到较

6、快发展，成为继原位肝移植后又一治疗各种肝功能衰竭的有效及有应用前景的方法［6-7］.我们采用D氨基半乳糖(Dgal)诱导大鼠肝衰竭，经脾脏移植原代人胚胎肝细胞及自行建立的永生化人胎肝细胞治疗急性肝衰竭大鼠，观察急性肝衰竭大鼠在存活率、肝脏功能及病理等方面的变化，为临床开展肝细胞移植治疗提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料永生化胎肝细胞由本室自行建立并保存，14～28a公司，Dgal购于重庆医科大学.　　1.2方法　　1.2.1急性肝衰竭模型的建立Dgal以生理盐水配成10mg/L液(pH7.0)，按2.2g/kgip，建立大鼠急性肝衰竭模型.　　1.2.2胎肝细

7、胞的准备①永生化胎肝细胞：将冻存的胚胎肝细胞复苏，以终浓度1×105/mL接种于培养瓶内，选择低糖DMEM为培养基，其中含10mL/L胎牛血清、10-9mol/L胰岛素，视细胞生长情况每3～5d换液1次，至细胞铺满瓶底，胰蛋白酶消化，0.4g/L台盼蓝（TrypanBlue）染色判断细胞活率，计数后制成肝细胞悬液备用.②胎肝细胞的分离培养：取引产死胎儿置无菌托盘中，常规消毒铺单后打开腹腔，显露游离门静脉后插管，用DHanks液（含0.01g/LEDTA,37℃,pH7.4，通以含950mL/LO2及50mL/LCO2的混和气体）以20mL/min的速度灌入，随后