永生化肝细胞移植治疗肝衰竭论文

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1、永生化肝细胞移植治疗肝衰竭论文李羽，王军，徐哲，张岩，白雪帆【关键词】永生化Immortalizedhepatocytetransplantationfortreatingliverfailure【Abstract】AIM:Tostudytherolesofimmortalizedandprimaryhumanfetalhepatocyteintrasplenicaltransplantationsintreatingtheratsine(Dgal).METHODS:ALFratsmortalizedhumanfetalhepatocytesintrasplenically;ratsof

2、groupⅡreceived2×107primaryhumanfetalhepatocytesintrasplenically;ratsofgroupⅢreceived1mLnormalsalineintrasplenically.AllratsreceivedCyclosporinA(CsA)at10mg/kgimsimultaneously.Thenthesurvivalrates,liverfunctionandliverhistologyofallratsprovedsignificantlyasparedanfetalhepatocytetransplantationintra

3、splenically,thesurvivalrateofALFratsintoxicatedproved.Theimmortalizedhepatocytesaterialinthestudyofhepatocytetransplantation.【Keymortalization;fetalhepatocytes;transplantation;liverfailure,acute;Dgalactosamine【摘要】目的：观察永生化胎肝细胞及胚胎肝细胞经脾脏移植对D氨基半乳糖（Dgal）诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用.方法：采用Dgal诱导大鼠急性肝衰竭，分3组进行治疗实验，Ⅰ组：

4、经脾脏移植永生化胎肝细胞2×107个；Ⅱ组：移植原代胚胎肝细胞2×107个；Ⅲ组：脾脏注射生理盐水1mL，各组大鼠同时肌肉注射环孢霉素A(CsA)10mg/kg.观察大鼠的存活率、肝脏功能、肝脏病理变化情况.结果：Ⅰ组及Ⅱ组大鼠存活率均显著高于Ⅲ组大鼠（72.2%vs22.2%,61.1%vs22.2%,P＜0.01）.freela公司，Dgal购于重庆医科大学.1.2方法1.2.1急性肝衰竭模型的建立Dgal以生理盐水配成10mg/L液(pH7.0)，按2.2g/kgip，建立大鼠急性肝衰竭模型.1.2.2胎肝细胞的准备①永生化胎肝细胞：将冻存的胚胎肝细胞复苏，以终浓度1×105/mL

5、接种于培养瓶内，选择低糖DMEM为培养基，其中含10mL/L胎牛血清、10-9mol/L胰岛素，视细胞生长情况每3～5d换液1次，至细胞铺满瓶底，胰蛋白酶消化，0.4g/L台盼蓝（TrypanBlue）染色判断细胞活率，计数后制成肝细胞悬液备用.②胎肝细胞的分离培养：取引产死胎儿置无菌托盘中，常规消毒铺单后打开腹腔，显露游离门静脉后插管，用DHanks液（含0.01g/LEDTA,.freelL/LO2及50mL/LCO2的混和气体）以20mL/min的速度灌入，随后于下腔静脉插管放出积血积液，并剪开胸腔，夹闭上腔静脉.灌注5min至肝脏变色后改为含0.05g/L胶原酶的Hanks液（3

6、7℃,pH7.4，通以含950mL/LO2,50mL/LCO2的混合气体）持续灌注5min.取下肝脏，置于含4℃Hanks液的平皿中，剪开肝被膜，疏下肝细胞，以单层无菌纱布过滤，制成混合细胞悬液，以100目及200目筛网过滤，500r/min清洗离心３次，每次２min，弃上清，以4℃Hanks液重悬，台盼蓝（TrypanBlue）染色判断细胞活率，计数后制成肝细胞悬液备用.本研究肝细胞活率为91%，肝实质细胞纯度＞94%.1.2.3肝细胞移植及分组92只大鼠在Dgal诱导肝衰竭48h后随机分为3组，各组大鼠在相同饲养条件下，体质量、鼠龄均无显著差异.Ⅰ组：30只，常规麻醉后切开腹腔，经脾

7、尾穿刺在脾脏实质内注射浓度为2×1010/L的永生化胎肝细胞悬液1mL，同时肌肉注射环孢霉素A(CsA)10mg/kg.其中18只用于观察2L，其余处理同I组.其中18只用于观察2L，随机选取18只用于观察2pliC,GasbarriniG,GasbarriniA.Amedicinebasedoncelltransplantationisthereafuturefortreatingliverdiseases［J］?AlimentP