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《酶联免疫检测技术的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、酶联免疫检测技术的应用真菌毒素的检测：黄曲霉毒素B1、M1以及T・2毒素，脫氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素DON),二乙酰草镰刀菌烯醇(DAS),玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素A(OA)o农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松(FN)、甲氟磷酸异已酶(SOMAN)、草不绿(Alachor)、西维因(Carbaryl)、多菌灵及克菌丹(Captan)等。其他类的检测：盐酸克伦特罗，河豚毒素，植物毒素如罄粟殓、吗啡、藻类毒素，苯并(a)踪，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如隸蛋白(Gliaclin),酱油蛋白(Soyprotein),花生蛋白(Peanutprotein),牛乳
2、清蛋白(BorineWheyProtein)等。随着食品工业的发展，对分析检测的要求越来越高，从而也使ELISA方法将更趋完善。一方而为提高ELISA方法的灵敏度和特异性，制备单克隆抗体的技术的发展，将和ELISA法互相结合，从而使食品卫生分析达到DNA分子结构水平，促使食品工业的健康发展。1放射免疫分析(RIA)放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)优点是特异性强、灵敬度高、精确、简便易行。它包括以标记抗原(Antigen,Ag)为特点的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以标记抗体(Antibody,Ab)为特点的免疫放射分析(Immunora
3、diometricassay,IRMA)o前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。最早建立的农药免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4・D和2,4,5・T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫法。但由于进行RIA需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题，其应用受到较大限制。1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。2酶免疫法(EIA)酶免疫法(EnzymeImmunoassay,EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通
4、过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用作标记物的酶有辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase)o酶标试剂制备容易、稳定、价廉。酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单的仪器作定量测定，是FI前农药监测屮应用最广泛的免疫分析技术。EIA法包括酶联免疫吸附分析法(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)、酶免疫试验法(Enzyme-monitoredImmunotest,EMIT)、竞争结合酶免疫分析法(CompetitiveBindingEnzymeIm
5、munosorbentAssay,EIA)和免疫酶分析法(ImmunoenzymometricAssay,IEMA)。其中基于竞争吸附的ELISA已成为农药监测中的首选方法。3荧光免疫分析(FIA)本世纪40年代，Coons采用荧光素标记抗体检测可溶性肺炎球菌多糖抗原,首次创建了荧光抗体检测技术。荧光免疫法具有专一性强、灵敏度高、标记物不易失活、价格低廉、无放射性污染等优点。至今，FIA已广泛应用于微量、超微量物质分析测定。FIA常用的荧光素有异硫氟酸酯(Fluoresceineisothiocyanate,FITC)和罗丹明(BLissamineRhodamineB200RB200)
6、等。将荧光免疫与光纤传感器结合形成的荧光免疫传感器是近年來荧光免疫法研究十分活跃的领域。荧光免疫传感器是将抗体(抗原)固定在适当基底上，实现生化荧光信号向光电信号的转变，以对待测物质进行定量检测。测定环境中农药残留的分子识别元件可以是AchE［10］抗体［11］和碱性磷酸酶等。Rogers等［12］将FITC标记的AchE固定在石英纤维上以检测酶的活性。乙酰胆碱水解时产生的H+猝灭纤维表面的荧光信号，荧光强度减弱。有机磷农药抑制AchE的活性，从而降低荧光猝灭能力，可检测溶液中10-8mol.L・1的AChE抑制剂，其响应时间小于lmin。Anis等将有机农药对硫磷抗体和FITC标记的
7、Anti-IgGAb蛋口固定在石英纤维上制得荧光免疫传感器。测定对硫磷的检测限为10-9mol.L-loSchulman利用竞争性荧光能量转移法原理，用FITC标记的多克隆氯乙异丙嗪(atrazine)抗体，用四甲基罗丹明标记农药氯乙异丙嗪，研制出光纤免疫传感器，通过增加能量转移的量改善了灵皱度。Nonhnip［13］利用光纤免疫传感器检测农药中拟除虫菊酯(pyrethroide)oBier等［14］以荧光和损耗波作用为基础，研究了光纤传感器对
