过山蕨组培快繁技术研究

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1、过山蕨组培快繁技术研究摘要利用组织培养技术研究过山蕨种苗快繁技术体系，包括抱子囊的消毒方法、抱子萌发培养基、配子体增殖培养基以及幼抱子体诱导基质,结果表明：较好的抱子囊消毒方法是70%酒精+5%次氯酸钠组合，适合过山蕨抱了萌发和配子体牛长发育的培养基是MS+2%蔗糖+0.7%琼脂,pH值6.0；适合配子体增殖的培养基为MS+2%蔗糖+0.7%琼脂+0.2mg/L6-BA+0.1mg/LNAA,pH值6.0；适合幼孑包子体诱导的基质配比是草炭+细河沙(1:l)o关键词过山酸；组培；快繁中图分类号S567文献标识码A文章编号1007-

2、5739(2016)22-0061-02AbsrtactUsingtissueculturetechnologytoresearchrapidpropagationlechnologyofCamptosorussibiricusRupr,includingthesporesacdisinfectionmethods,sporegerminationmediumandyoungsporophyteinducingmatrix・Theresultsshowedthatbettersporesacdisinfectionmethodis

3、70%alcohol+0.5%NaClOcombination,SuitablemediumforsporesgerminationandgametophytegrowthisMS+2%sucrose+0.7%agar,pH6.0；SuitablemediumforgametophyteproliferationisMS+2%sucrose+0.7%agar+0.2mg/L6-BA+O.1mg/LNAA,pH6.0；Suitablematrixratioforyoungsporophyteinduccdispeat+smallpa

4、rticlesriversand(1：1)・propagation?八山蕨(CamptosorussibiricusRupr)又名过桥草、马蹬草等，为铁角蕨科植物，以地上部分入药，河南省伏牛山、大别山、桐柏山等山区均有分布。过山廠性平味淡，具有活血化瘀、消炎止痛、止血、解毒等功效，民间多以其治疗动脉炎症、外伤出血、子宫出血、偏瘫、下肢溃疡、肝炎等症。过山蕨主含三祜类、黄酮类、苯丙素类、酚酸类、有机酸类、含硫化合物、糖类、脂肪酸及其昔类等化学成分，药理研究发现其具有抗肿瘤、抗氧化、扩张血管、抑制血小板聚集、抗艾滋病等作用[1-2]o

5、市场所售过山蕨多为野生，因其生长缓慢，野外繁殖率低，过度采挖造成过山蕨野牛资源急剧下降，2005年被收载入《河南省重点保护植物名录》。目前，过山蕨繁殖普遍采用分株法，繁殖速度较慢，远不能满足日益增长的市场需求。因此，利用组培技术进行过山蕨种苗的快速繁殖技术研究，是保护和利用过山蕨的必要途径。本试验筛选出过山蕨孑包子萌发培养基、配子体增殖培养基及幼抱子体诱导最佳基质配比，从而建立过山廠种苗的快速繁殖技术体系，以便稳定、高效牛产过山蕨种苗，缓解野生资源压力,满足市场需求。1材料与方法1.1试验材料采集河南省南阳市西峡县太平镇山区野生过

6、山嗽植株，由河南农业大学中药材工程技术研究中心高致明教授鉴定为铁角蕨科过山蕨(CamptosorussibiricusRupr),种植于南阳理工学院张仲景药用植物园，待孑包子成熟以后，采集砲子囊放入冰箱冷藏备用。1.2试验方法1.2.1孑包子囊的消毒。将过山蕨砲子囊用滤纸包好，消毒方法：①70%酒精。消毒15〜25s,无菌水漂洗4〜5次；②5%次氯酸钠。消毒5min,无菌水漂洗4~5次；③0.1%升汞。消毒5〜8min,无菌水漂洗4〜5次；④70%酒精+5%次氯酸钠。先用70%酒精消毒15-25s,再用5%次氯酸钠消毒5min,无

7、菌水漂洗4〜5次；⑤70%酒精+0.1%升汞。先用70%酒精消壽15~25s,再用0・1%升汞消毒5~8min,无菌水漂洗4~5次；⑥5%次氯酸钠+0.1%升汞。先用5%次氯酸钠消毒5min,无菌水漂洗4〜5次，再用0・1%升汞消毒5~8min,无菌水漂洗4~5次。消毒后的抱子囊无菌条件下接种至MS培养基上，每个处理接种10瓶，每瓶接种3~5个砲子囊，3次重复。30d后，观察砲子萌发率和污染率，筛选最佳消毒方法。1.2.2砲子萌发。将过山歐砲子囊用滤纸包好，先用70%酒精消毒15〜25s,再用5%次氯酸钠消毒5min,无菌水漂洗4

8、〜5次，将消毒后的鞄子囊无菌条件下接种至不同无机盐含量（MS、1/2MS、1/4MS和1/8MS,蔗糖浓度2%,琼脂0.7%,pH值6.0）和不同蔗糖浓度（MS,琼脂0.7%,蔗糖浓度1%、2%、3%、4%,pH值6.0）的培养基上，每种培养基接种