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《药学毕业论文小鼠促进骨髓抑制恢复相关因子il7基因的识别与克隆》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、XX大学毕业论文小鼠促进骨髓抑制恢复相关因子IL7基因的识别与克隆2014年6月25日作者：沈娟,胡耀华，邵红伟,肖兰凤【摘要】目的寻找促进骨髓抑制恢复的相关细胞因子，进行骨髓抑制时基因表达差异分析，并对表达上调较大的细胞因子进行克隆验证。方法尾静脉注射5Fu构建小鼠骨髓抑制模型，运用基因芯片方法分析正常小鼠与骨髓抑制模型第0,3,7,11,14天的基因表达差异，针对表达上调较大的鼠IL7基因设计引物，以RTPCR克隆其编码序列，并构建phCMV/IL7真核表达载体。结果得到一组符合促进骨髓抑制恢复细胞因子特点
2、的基因，其屮细胞因子IL7表达量升高30倍。结论IL7符合促进骨髓抑制恢复细胞因子的特点，为研究骨髓抑制恢复的新方案奠定了基础。【关键词】基因差异表达；IL7；基因克隆；骨髓抑制Abstract:ObjectiveTofindthecytokinesthatantagonizedmyelosuppression,andanalyzegeneexpressioninmyelosuppressedmiceandconfirmremarkableupregulationofgeneexpression・Methods
3、Themyelosuppressedmicemodelwasmadebyinjectionof5Fuintailveils.Thegenedifferentialexpressioninday0,3,7,11and14respectivelywereanalyzedwithgenechip・SpecificprimersofIL7whichroseremarkablywasdesignedtocloneitsfulllengthcodingsequence(CDS)byRTPCR,andthentheeukar
4、yoticvectorphCMV/IL7wasconstructed.ResultsAgroupofcytokinesthatmightplaypositiveregulatoryrolesinsuppressionandregenerationofhematopoiesiswerefound・TheexpressionlevelofIL7increasedby30timescomparedwiththenormalcontrol.ConclusionsIL7wasapotentialupregulatingc
5、ytokine,andmightbeclinicallyusedformyelosuppression.Keywords:genedifferentialexpression;IL7;genecloning;myelosuppression癌症是当今人类生命的一大杀手，而化学治疗和放射治疗以及许多其他抗肿瘤治疗方法，都是针对快速分裂的细胞，因而主要副作用是令同样快速分裂的血细胞前体——造血干细胞受抑制，称为骨髓抑制。它可导致贫血、抗感染能力下降（免疫抑制）等不良反应，从而严重影响肿瘤的治疗效果。在骨髓移植恢复中
6、，骨髓抑制恢复造血刺激因子在血象调节中起着至关重要的作用，恢复的正刺激因子在骨髓抑制时表达均应激升高，后随着骨髓恢复降低至正常表达水平，寻找骨髓抑制恢复中的关键因子意义重大。作为白细胞介素家族成员之一，1989年白细胞介素7被发现并命名。它全长1589bp,包含6个外显子（531bp）、相应的内含子、5,和3,非翻译区；经过转录、翻译、切掉信号肽、修饰加工，形成成熟的含152个氨基酸的IL7蛋白质，是相对分子质量为25kDa的糖蛋白［l］oIL7是一种多效细胞因子，具有广泛的免疫效应，在T细胞的生长、存活及分化
7、方面有重要作用［2］,同时有潜在趋化性质，介导单核细胞参与炎症反应。近儿年发现IL7在多方面均发挥很大的潜在价值，在慢性粒细胞口血病［3］、抗肿瘤［4］、抗HIV病毒感染［5］、急性冠脉综合征［6］等病理方面均有显著作用。木实验室经大规模基因表达差异分析发现，IL7基因在小鼠骨髓抑制模型中表达明显升高，可能是自体促进骨髓抑制恢复的因素之一。在正常小鼠中，IL7由于表达量较低，不易克隆。但在骨髓抑制模型小鼠的骨髓组织中克隆得到了IL7基因，验证了IL7基因上调，然后将其构建到真核高效表达质粒phCMV中，为进一步
8、验证其在骨髓抑制恢复方面功能奠定基础。1材料与方法1」主要材料大肠杆菌DH5a和phCMV真核表达载体由木实验室保存，SPF级雄性8周龄BALB/c小鼠购自上海中科院动物所，体质量（20±1）g,MMLV反转录试剂盒购白Promega公司，Taqplus酶、Trizol＞限制性内切酶EcoRI、XhoII购自Fermentas公司，RNA抽提试剂盒购自Qiagen，凝胶纯化试剂盒、质粒
