小鼠il-10基因的克隆

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1、小鼠IL-10基因的克隆及其原核表达林臻桢07生技2班2007060319IL-10简介姓名：白细胞介素10（IL-10）曾用名：细胞因子合成抑制因子（CSIF）,出身地：主要由Th2细胞产生,Tho细胞,Th细胞,CD8+T细胞,活化的B细胞,单核-巨噬细胞,kupffer细胞,肝细胞,角化细胞等缺点：短暂的自限性分泌,在一般水平IL-10的分泌量都很低只有在特殊的诱导和刺激下才可能出现高水平的表达。光荣事迹：细胞因子在免疫调节和炎症反应上有多重性。它可下调节的Th1细胞因子的反应，MHCⅡ类抗原表达，巨噬细胞共刺激分子。它也提高B细胞生存，增殖

2、，抗体的生产。这可以阻止细胞因子NF-κB活性，并在JAK-STAT信号通路的调节。根据GenBank中报道的小鼠（登录号NM-010548）IL210mRNA序列设计特异性引物P1和P2,预期扩增长度为537bp。P1:5′GGATCCATGCCTGGCTCAGCACTGCTATGCTGCCTGCTCTT3′P2:5′AAGCTTTTAGCTTTTCATTTTGATCATCATGTATGC3′于37℃下用MEM培养液（8%的犊牛血清，10mg/L刀豆素ConA以及1%双抗(终浓度为100μg/mL青霉素、链霉素)进行培养。根据总RNA提取试剂盒说明

3、技术路线总RNA的提取脾细胞的制备IL210基因的RT-PCR扩增PCR产物凝胶回收克隆及序列测定原核表达载体pET2IL210的构建IL210在大肠杆菌中的表达及其检测引物的设计与合成酶切位点：BamHⅠHindⅢ大肠杆菌JM109感受态细胞含Amp100g/mL的LB培养基37℃振荡培养16hpMD18-T提取质粒用限制性内切酶（BamHⅠ、HindⅢ）酶切和PCR方法鉴定获得重组质粒命名为pT-IL-10质粒pT-IL-10BL21宿主菌双酶切、回收片段、连接转化质粒pT-IL-10原核表达载体pET28apETIL-10原核表达载体pET28

4、aIPTG诱导剂量为1μL/mL的pETIL-10MIPTG诱导剂量为1.5μL/mL和2.0μL/mL的pETIL-10MBL21菌未诱导转染重组pETIL-10诱导的BL21的免疫印记southern印迹杂交