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《小鼠FasL基因克隆和在软骨细胞中表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、326ISSN1007-8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmunol)2003,19(4)文章编号:1007-8738(2003)04-326-04小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达胡洪亮,曹谊林,刘 阳,刘 伟,崔 磊,商庆新(上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室,上海200011)证。通过pLNCX2转染软骨细胞,转染率为60.64%。流式ThecloningofmouseFasLgeneandex2细胞仪检测到FasL蛋白的表达,并能显著抑制同种异体的单pressioninchondrocytes向混合淋巴细胞反应,刺
2、激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%。结论:克隆到的mFasL基因,并能通过pLNCX2有HUHong2liang,CAOYi2lin,LIUYang,LIU效表达。表达产物具有显著抑制同种异体单向混合淋巴细胞Wei,CUILei,SHANGQing2xin反应的活性。KeyLaboratoryofTissueEngineering,AffiliatedNinthPeople关键词:逆转录病毒;FasL;RT2PCR;软骨细胞;T2A克隆Hospital,ShanghaiSecondMedicalUniversity,Shanghai中图分类号:Q786 文献标识码:A20
3、0011,ChinaAbstractFasL又称CD95ligand(CD95L),为II型膜糖蛋白,属于AIM:ToclonemFasLcDNA,theninsertitintoretrovirusex2TNF家族中的成员。小鼠FasL含281个氨基酸,相对分子pressionsystempLNCX2,andexpressmFasLcDNAinchondro2质量(Mr)约为40000,表达于激活的淋巴细胞和一些免疫赦cytestostudyitsfunction.METHODS:RT2PCRwasappliedto免区域(immunologicalprivilegedsite)
4、,如:眼、内耳、睾丸和脑amplifymFasLcDNAfromthetotalRNAofactivatedmouse[1]组织等。FasL与其特异性受体Fas结合,可导致Fas阳性spleenlymphocytes.ThecDNAwasinsertedintoaT2cloning细胞走向凋亡。这一途径不仅参与免疫细胞的发育,还能下vector,thensubclonedintopLNCX2.Aftertransfectionofchon2调免疫应答,介导CTL和NK细胞的免疫杀伤,在维持组织drocytes,expressionofFasLcDNAwasdetectedbyFAC
5、S,and器官内细胞自稳态和正常的免疫功能中起重要的调节作activityofexpressedproductwasanalyzedbysinglemixedlym2[2,3]用。本研究中我们报道了从激活的小鼠脾脏淋巴细胞中,phocytereaction(SMLC).RESULTS:mFasLcDNAfragmentof用RT2PCR法克隆FasLcDNA,并将其转染软骨细胞获得有0.855kbwassuccessfullyclonedandverifiedbysequencing.效表达。表达产物具有显著抑制同种异体单向混合淋巴细胞Thetransfectionefficien
6、cyofmFasLcDNAinchondrocytesde2反应(SMLC)的功能。terminedbyFACSwas60.64%.Expressedproductcouldevi2dentlyinhibitSMLCofallogeneiclymphocytes.It’sstimulatingindex(SI)reducedto11.71%ascomparewiththeuntransfected1 材料和方法chondrocytes.CONCLUSION:ClonedrecombinantpLNCX22FasL1.1 材料 逆转录病毒载体pLNCX2和包装细胞系PT67,cane
7、ffectivelyexpressmFasLinchondrocytes,andcanevi2均购自Clontech公司。NIH3T3细胞购自ATCC公司。dentlyinhibitSMLCofallogeneiclymphocytes.G418、Polybrene、ConA、ionomycin和mIL22均购自Sigma公Keywords:retrovirus;FasL;RT2PCR;chondrocyte;T2Acloning司。脂质体Lipofectin、胎牛血
